ВЕТЕРИНАРИЯ
39
п.н. фрагмента гена
bGH-AluI.
Фрагмент рестрикции 35 п.н. не визуализируется. Положение на геле
специфических полос показано стрелками. Электрофорез проводили в 2
% агарозном геле
(SeaKemLEAgarose, Lonza
, США)
Длина амплифицируемого фрагмента гена
bGH
составляет 208 п.н.
Длина фрагментов пос
-
ле рестрикции составляет 172 и 35 п.н. На элек
-
трофореграмме могут быть видны варианты по
-
лос определенной длины, характерные для гено
-
типов: одна полоса 208 п.н. (генотип
bGH-AluI
VV
);
две полосы172 и 35 п.н. (генотип
bGH-AluI
LL
); три
полосы 208, 172 и 35 п.н. (генотип
bGH-AluI
LV
).
Фрагмент рестрикции 35 п.н. на агарозном геле
не визуализируется.
Анализ полиморфизма нуклеотидной по
-
следовательности гена
bGHR
в экзоне 8 прово
-
дился с помощью рестриктазы
SspI
.
Рестриктаза
SspI
распознает Т→А транзицию в экзоне 8. Дан
-
ная SNP вызывает подстановку полярного, хотя
и незаряженного остатка тирозина вместо нейт
-
рального фенилаланина в положении 279 белка.
Сайтом узнавания для рестриктазы является по
-
следовательность ААТ↓АТТ. Разрезаемый фер
-
ментом амплификат содержит нуклеотид Т соот
-
ветствующий аллелю
bGHR-SspI
F
[25]. В случае
присутствия
A-
нуклеотида сайт рестрикции исче
-
зает, такой аллель обозначен как
bGHR-SspI
Y
.
Длина амплифицируемого фрагмента гена
bGHR
составляет 182 п.н. Длина фрагментов после ре
-
стрикции 158 и 24
п.н. На электрофореграмме
могут быть видны варианты полос определенной
длины, характерные для генотипов: одна полоса
182 п.н. (генотип
bGHR-SspI
YY
), две полосы158 и
24 п.н. (генотип
bGHR-SspI
FF
); три полосы –
182,
158 и 24 п.н. (генотип
bGHR-SspI
FY
). Фрагмент 24
п.н.
на агарозном геле не визуализируется
(рисунок 3).
Рисунок 3
–
Электрофореграмма ДНК
-
типирования полиморфизма
bGHR-
SspI
Дорожка 1 –
ПЦР
-
продукт 182 п.н. фрагмента гена
bGHR-SspI
; дорожки 2, 3, 4 –
фрагмент рестрикции
158 п.н., соответствующий генотипу
bGHR-SspI
FF
; дорожка 5 –
фрагмент рестрикции 182 п.н.,
соответствующий генотипу
bGHR-SspI
YY
; дорожка 6 –
фрагменты рестрикции 182 и 158 п.н.,
соответствующие генотипу
bGHR-SspI
FY
. Фрагмент 24 п.н. не визуализируется. Использован маркер
молекулярных масс
O
’
RangeRuler
TM
50 bpDNALadder, Fermentas
, Литва. Положение на геле
специфических полос показано стрелками. Электрофорез проводили в 2
% агарозном геле
(SeaKemLEAgarose, Lonza
, США)
Генотип животного по всем анализируе
-
мым генамдокументируетсяи заносится
в общую
базу данных.
Статистическая обработка результатов ис
-
следования
проведена с использованием стан
-
дартного пакета программ «
STATISTICA
6.0»
(StatSoft, In
с. 1994
–
2001), при этом были ис
-
пользованы модули
BasicStatistic / tables, Non-
parametricStatistics.
C
равнение выборок по распределению
частот аллелей исследуемых генов, а также
оценку соответствия фактического распреде
-
ления генотипов теоретически ожидаемому по
закону Харди
-
Вайнберга, проводили с помощью
с помощью критерия
χ
2
. Различия во всех слу
-
чаях рассматривались как статистически досто
-
верные при уровне значимости Р <0,05.
Нами были определены
частоты встречае
-
мости аллелей и генотипов по каждому полимор
-
физму в обеих выборках.Оценка генетической
структуры анализируемых популяций включала
сравнение распределения частот аллелей, а
также
анализ соответствия наблюдаемых частот
генотипов теоретически ожидаемому
равновес
-
ному распределению
в соответствии с законом
Харди
-
Вайнберга. Результаты оценки различий
распределения относительных частот аллелей
исследуемых генов в популяции аулиекольского
и казахского белоголового скота приведены в
таблице 2.
ВЕТЕРИНАРИЯ
41
С учетом полученных данных можно за
-
ключить, что обе исследованные породы, пред
-
ставленные проанализированными выборками
являются перспективными для дальнейшей
оценки возможностей применения полиморизмов
генов
bPit-
1, bGH
и
bGHR
в качестве генети
-
ческих маркеров мясной продуктивности.
В результате ДНК
-
типирования образцов
крупного рогатого скота (аулиекольской и казах
-
ской белоголовой пород) были установлены
генотипы животных по трем полиморфным генам
соматотропинового каскада
bPit-
1, bGH
и
bGHR.
В выборках обеих пород выявлены поли
-
морфные варианты
bPit-
1-HinFI
А
и
bPit-
1-HinFI
А
,
bGH-AluI
V
и
bGH-AluI
L
,
bGHR-SspI
Y
и
bGHR-SspI
F
.
Это делает целесообразным
проведение даль
-
нейших исследований ассоциации данных этих
полиморфизмов с признаками мясной продуктив
-
ности у представителей аулиекольской и казах
-
ской белоголовой пород для выявления генети
-
ческих маркеров мясной продуктивности.
По полиморфизмам
bGH-AluI
и
bGHR-SspI
установлено, что аллель являющийся редким у
аулиекольской породы, у казахской белоголовой
является более частым. Это позволяет предпо
-
ложить противоположный фенотипический эф
-
фект у животных аулиекольской и казахской бе
-
логоловой пород и рекомендовать проведение
дополнительной оценки их фенотипического эф
-
фекта относительно показателей общей выбор
-
ки.
Достарыңызбен бөлісу: