В каждой чашке размещают 4 диска на равном удалении друг от друга, на расстоянии 2 см от стенки чашки. Диски следует обозначить начальной буквой антибиотика. Чашки Петри с бумажными дисками выдерживают при комнатной температуре один час, а затем помещают в термостат при +37°С на 16-18 часов в перевернутом состоянии.
Определение результатов осуществляют с помощью линейки, которой измеряют диаметр зон задержки роста микробов вокруг дисков. Отсутствие зон задержки роста указывает на устойчивость микробов к данному антибиотику; наличие зоны задержки роста диаметром 15 мм означает малую чувствительность микроба к антибиотику; зона более 24 мм говорит о высокой чувствительности к данному антибиотику.