Белоктардың фолдингі

Сурет 3.
Жасушаішілік ЯМР тірі жасушалардағы цитозолдық ақуыздардың конформациялық өзгерістерін анықтау үшін 
қолданылады. (А) қызығушылық гені бар Вектор (жасыл көрсеткі) белгіленген ортада уақытша трансфекция арқылы жеткізіледі. 
Қызығушылық тудыратын ақуызды (жасыл) білдіретін жасушалар жиналып, диаметрі 3 мм Шигеми ЯМР түтігіне орналастырылады 
жəне жасушаішілік ЯМР талдауы үшін қолданылады. (B–D) apo−дағы NMR 1 H-15N Sod1 спектрлері жəне мономерге бір мырыш 
ионымен (көгілдір) жəне димерленген күйге (C) жəне мыспен, мырышпен байланысты толық жетілген тотықсыздандырылған күйде 
(B) жəне дисульфидті тотыққан күй (D) адам жасушаларында.

Ішкі ретсіз ақуыздар (VLD) күшті ЯМР сигналдарына ие жəне жасушаішілік ЯМР зерттеуіне жарамды. Адамның жасушалық линияларындағы 
ақуыздардың қатпарлануын алдын ала жасушаішілік ЯМР зерттеуіне нейродегенеративті ауруларға қатысатын α-синуклеин жəне Тау сияқты VLDS кірді. 
Е-де α-синуклеинді ЯМР анықтағаннан кейін. coli жасушалары [40], таңбаланған 15N α-синуклеин сүтқоректілердің жасушаларына жеткізілді жəне 
жасушалардағы α-синуклеин концентрациясын қатаң бақылау үшін электропорация протоколын қолданды, бұл жасушалардың өміршеңдігінің минималды 
бұзылуымен цитоплазмада ақуыздың біркелкі таралуына əкелді [41]. Əр түрлі жасуша сызықтарындағы α-синуклеин конформациясы, соның ішінде B65 
жəне SK-N-SH нейрондық жасушалары жəне RCSN-3 жасушалары 1 H-15N корреляциясының 2D ЯМР спектрлерімен салыстырылды. бұл зерттеу əртүрлі 
жасуша сызықтарындағы α-синуклеиннің кейбір жалпы белгілерін анықтады:
(1) мономерлі ретсіз α-синуклеиннің негізгі конформациясы əртүрлі жасушаішілік орталарда ұқсас болды; (2) α-синуклеиннің N-ұшы жасушаларда 
ацетилденуге ұшырайды; (3) α-синуклеин жасуша мембраналарымен тұрақты өзара əрекеттесуді жасамайды; дегенмен, α-синуклеиннің N-жəне C-ұштары 
цитоплазмалық компоненттермен уақытша əрекеттеседі жəне / немесе мембрана [41]. Тотығу стрессінің тірі жасушалардағы α-синуклеиннің тағдырын 
қалай өзгертетінін одан əрі анықтау 15N таңбаланған N-терминалды ацетилденген жеткізу арқылы жүзеге асырылды,
метионин - (Met1, Met5, Met116 жəне Met127)-α-синуклеинді нейрондық емес жəне нейрондық ми жасушаларына тотықтырады [42]. Уақытша 
ажыратымдылықтағы жасушаішілік ЯМР tyr125 фосфорлануы метиониннің С-терминалының тотығуымен таңдамалы түрде бұзылатынын көрсетті, бұл 
жасуша ортасының өзгеруі α-синуклеиннің трансляциядан кейінгі модификацияларына таңдамалы түрде əсер етуі мүмкін жəне осылайша оның 
конформациясын, конформациялық ландшафтын жəне агрегацияға бейімділігін бақылауы мүмкін [42]. Изотоптармен байытылған Тау hek-293t 
жасушаларына электропорация əдісімен жеткізілді жəне тірі жасушалардағы Тау ЯМР спектрі алынды [43]. Тау негізінен hek-293t жасушаларында МТ 
байланыстыратын қайталауларында микротүтікшелермен (МТ) байланысатыны анықталды. сондай-ақ, фосфорланған Tau hek-293 Т жасушаларына 
жеткізілгеннен кейін аурумен байланысты Tau фосфорлануы дереу жойылатыны анықталды, бұл стресстік жағдайларда жасушалық қорғаныстың əлеуетті 
механизмін білдіреді.

Жасушаішілік ЯМР in situ мембраналық ақуыздарды зерттеу үшін де қолданылады. Жергілікті 
мембраналардағы EGF эпидермиялық өсу факторы рецепторының (EGFR) активациясының 
құрылымдық жəне динамикалық қасиеттерін тікелей зерттеу үшін динамикалық ядролық 
поляризация (DNP) қолдайтын ssnmr негізіндегі тəсіл əзірленді [44]. A431 жасушалары [13c, 15N] 
таңбаланған a431 мембраналық көпіршіктерін алу үшін таңбаланған ортада өсірілді. Нəтижелер 
жасушадан тыс доменнің (ECD) лигандсыз күйі жоғары динамикалық, ал жасушаішілік киназа 
домені (KD) қатты екенін көрсетеді. Лигандты байланыстыру EGFR домендерінің жалпы жəне 
жергілікті қозғалысын, соның ішінде ECD жəне C-терминал аймағын шектейді. Лигандпен 
байланысу арқылы ECD конформациялық энтропиясының төмендеуі жасушаішілік тирозиннің 
аллостериялық активтенуін тудыратын рецепторды димеризациялау үшін қажетті кооперативті 
байланыстыруға ықпал етеді деп болжануда [44]. Жасушаішілік ЯМР көмегімен зерттеулердің 
жинақталуы жасушаішілік ЯМР-дің ақуыздардың қатпарлануын, құрылымдық динамикасын жəне 
нейродегенеративті аурулардағы, қатерлі ісіктердегі жəне белоктардың конформациясымен 
байланысты басқа аурулардағы қалдық деңгейіндегі өзара əрекеттесуін зерттеу əлеуетін көрсетеді.