Клиникалық зертханалық зерттеу әдістері пәнінен Іс-дағдылар стандарттары Мамандық

жүктеу/скачать 0,61 Mb.

бет	93/111
Дата	20.06.2022
өлшемі	0,61 Mb.
	#37108

1 ... 89 90 91 92 93 94 95 96 ... 111

Байланысты:
стандарттар

Пробиркілерді қойыңыз	Тәжірибе сынамасы, мл
Бақылау сынамасы, мл
2,4 ДНФГ ерітіндісін	0,5	0,5
Қан сарысуы	-	0,1

7. Араластырыңыз, 20 минутқа бөлме температурасында (20-25гр)қалдырыңыз
8. Екі пробиркаға да 5 мл-дан 0,4 моль/л NаОН ертіндісін қоыңыз;
9.Араластырыңыз және 5-10 минуттан кейін бақылау ертінлдісіне қарсы
фотометрлеңіз, толқын ұзындығы 500-560 нм кювета қалыңдығы 1 см.
ІІ. Калибрлік кестені құру:
1) 7 дана химиялық пробиркаларды алып номерлеңіз (1,2,3,4,5,6, және бақылау);
2) Калибраторларды құйыңыз 1-ші пробиркаға -0,05 мл,
2-шісіне- 0,10 мл,
3-шісіне- 0,15 мл,
4-шісіне- 0,20 мл,
5-шіге – 0,25 мл,
6-шысына – 0,30 мл
3) Дистилденген суды құйыңыз 1-ші пробиркаға 0,55 мл;
2-шісіне - 0,50 мл;
3-шісіне - 0,45 мл,
4-шісіне - 0,40 мл,
5-шісіне - 0,35 мл
6-сына - 0,30 мл
Бақылау пробиркаға - 0,60 мл
4) Барлық пробиркаларға 0,5 мл-дан 2,4 ДНФГ ерітіндісін қосады

№	калибратор	Дистилд. су	2,4-ДНФГ ерітніндісі	Сынамадағы пируват мөлшері	АлАТ активтілігі нің каталитикалық конццентрациясы
№	мл	мл	мл	нмоль	мкмоль/л	моль/л
1	0,05	0,55	0,5	50	0,139	0,5
2	0,10	0,50	0,5	100	0,278	1,0
3	0,15	0,45	0,5	150	0,417	1,5
4	0,20	0,40	0,5	200	0,556	2,0
5	0,25	0,35	0,5	250	0,695	2,5
6	0,30	0,30	0,5	300	0,834	3,0
Бақы лау	-	0,60	0,5	-	-	-

5. Пробирка ішіндегісін араластырыңыз және 20 минуттан соң (20-25◦С) 0,4 мл/л NаОН ертіндісін 5 мл-ден қоыңыз;
5-10 минуттан соң дистилденген суға қарсы фотометрлеңіз, толқын ұзындығы 500-560 нм., кювета қалыңдығы 1 см.
Есептеу қан сарысуындағы фермент активтілігінің есебін калибрлік кестемен есептейді.
1. Калибрлік кестемен коэфициентті к есептеңіз: к= С/*Е, Е = (Екал- Ек), мұнда: Екал – калибрлік сынама экстинкциясы, Ек – бақылау экстинкциясы. С – АлАТ (активтілігі) каталитикалық концентрациясы калибрлік сынамада мкмоль/л немесе ммоль/л.
2. АлАТ(активтілігі) каталитикалық концентрациясы мкмоль/л немесе ммоль/л –де мына формуламен есептейді АлАТ = Етәж.сын х к, мұнда к – калибрлік кесте бойынша есептелген коэфициент, Етәж.сын – бақылауға қарсы өлшенген тәжірибе сынамасы экстинкциясы.
Ескерту:
Егер АлАТ белсенділігінде 3 ммоль/л = 0,834 мкмоль/л – ден жоғары болса қан сарысуын сұйылту керек. Белсенділікті есептеуде сұйылту дәрежесін ескеру керек, кейбір жағдайда сұйылтылған сарысуда сұйылту дәрежесімен АлАТ белсенділігі арасында пропорционалдық болмауы мүмкін.

Қалыпты көрсеткіш: АлАТ – 0,1 – 0,68 ммоль/л
немесе 0,028 – 0,19 мкмоль/л
АСПАРТАТАМИНОТРАНСФЕРАЗАНЫ АНЫҚТАУ (АсАТ)

Мақсаты:
- АсАТ ферментінің активтілігін анықтау әдісін меңгеру;
Көрсетпесі:
- Жүрек және бауыр ауруларының дифференциялдық диагностикасы;
Принципі:
Аспартатааминотрансфераза АсАТ L – аспартат және α – кетоглутарат арасындағы реакцияны катализдейді, нәтижесінде олар L – глутамат және оксалоацетатқа айналады. Сынамадығы оксалоацетат мөлшерін 2,4-динитрвинилгидрозин реакциясына негізделіп фотометрлеумен анықтайды. Анықтау сілтілі ортадағы α – оксоглутарлы қышқыл гидразондардың оптикалық тығыздығын өлшеуге негізделген.
Рессурстар:
1) реактивтер жиынтығы (Витал);
2) КФК, толқын ұзындығы -500-560 нм, кювета – 1 см;
3) калибрлік кесте;
4) термостат;
5) лаб.ыдыс (1, 0,1 мл пипеткалар, химиялық пробиркалар);
6) штатив,
7) анализ нәтижесін тіркейтін жұмысшы журнал,
8) бланкілер;
9) шыныға жазатын қарандаш;
10) резеңке қолғаптар.
Реактивтер:
Реагент №1. Субстратты қоспа.
DL – аспарагин қышқылы............................................................0,1 моль/л;
α-кетоглутарат қышқылы ............................................................2,0 ммоль/л;
фосфатты буфер, рН 7,4.............................................................0,1 моль/л
Реагент №2. 2,4 ДНФГ
2,4 – динитрофенилгидрозин......................................................1,0 ммоль/л
Тұз қышқылы.................................................................................1,0мол/л
Реагент №3. Калибратор
Натрий пируваты...........................................................................1,0 ммоль/л
Реагент №4. Ащы натр...............................................................4,0 моль/л
Биоматериал: гемолиз ізі жоқ балғын қан сарысуы
Жұмысшы ерітіндісін әзірлеу:
Натрий гидрототық ерітіндісі:
1. 4 –ші флакон ішіндегісін 10 рет карбонаттсыз бидистелденген суда сұйылту;
Іс-қимыл алгоритмі:
1. Анализді жүргізу
1. 2 пробирканы алыңыз; сынама және бақылау;
2. Екі пробиркігеде 0,5 мл субстрат-буфер ертіндісін өлшеп құйыңыз;
3. сынамаға 0,1 мл қан сарысуын құйыңыз;

Пробикілерді қойыңыз	Тәжірибе сынамасы, мл	Бақылау сынамасы, мл
Субстратты-буферлі ерітін ді	0,5	0,5
Қан сарысуы	0,1	-

4. су моншасында 30 минут 37◦С инкубациялаңыз;
5. Екі пробиркаға да 0,5 мл 2,4 ДНФГ ерітіндісін қосыңыз;
6. бақылау пробиркасына 0,1 мл қан сарысуын қосыңыз;

жүктеу/скачать 0,61 Mb.

Достарыңызбен бөлісу:

1 ... 89 90 91 92 93 94 95 96 ... 111