Питательные среды
Агар с кровью (см. главу 7).
Агар с сывороткой (см. главу 7).
Среды Гисса (сухие).
Мясопептонный желатин (МПЖ). К 100 мл МПБ прибавляют 10-15 г
мелко нарезанного желатина. Желатин должен набухать при медленном
нагревании в водяной бане (при температуре 40-50° С). К расплавленному
желатину прибавляют 10% раствор натрия карбоната (питьевая сода) и
устанавливают рН 7,0. Затем сразу фильтруют через складчатый фильтр.
Фильтрование идет медленно. Для ускорения процесса фильтрацию можно
производить в горячем автоклаве. Профильтрованную среду разливают в
пробирки по 6-8 мл и стерилизуют. Стерилизацию производят либо дробно при
температуре 100° С 3 дня подряд, либо одномоментно при 110° С 20 мин в
автоклаве. Охлаждение среды производят в пробирках, поставленных
вертикально.
Приготовление молока. Свежее молоко доводят до кипения, ставят в
прохладное место на сутки, освобождают от сливок, вновь кипятят. Оставляют
на сутки и снимают верхний слой. Обезжиренное молоко фильтруют через
слой ваты, затем подщелачивают 10% раствором натрия карбоната до рН 7,2 и
разливают в пробирки по 5-6 мл.
Бульон Мартена. К мясной воде прибавляют равное количество пептона
Мартена (фарш из свиных желудков, подвергшихся воздействию
хлороводородной кислоты). Полученную смесь кипятят 10 мин,
подщелачивают 10% раствором гидроксида натрия до рН 8,0, добавляют 0,5
натрия ацетата, вновь кипятят и разливают в стерильную посуду. К бульону
Мартена прибавляют 0,25% глюкозы.
Среда Китта - Тароцци (см. главу 34).
Streptococcus pneumoniae (пневмококк)
Пневмококки впервые описаны Р. Кохом (1871).
Морфология. Пневмококки - это диплококки, у которых стороны клеток,
обращенные друг к другу, уплощены, а противоположные стороны вытянуты,
поэтому они имеют ланцетовидную форму, напоминающую пламя свечи (см.
рис. 4). Размер пневмококков 0,75-0,5 × 0,5-1 мкм, располагаются они парами.
В жидких питательных средах часто образуют короткие цепочки, приобретая
сходство со стрептококками. Превмококки неподвижны, не имеют спор, в
организме образуют капсулу, окружающую оба кокка. В капсуле содержится
термоустойчивое вещество антифагин (защищающий пневмококк от
фагоцитоза и действия антител). При росте на искусственных питательных
средах пневмококки утрачивают капсулу. Пневмококки грамположительны. В
старых культурах встречаются грамотрицательные бактерии.
Культивирование. Пневмококки - факультативные анаэробы. Растут при
температуре 36-37° С и рН среды 7,2-7,4. Они требовательны к средам, так как
не могут синтезировать многие аминокислоты, поэтому растут только на
средах с добавлением нативного белка (крови или сыворотки). На агаре с
сывороткой образуют мелкие, нежные, довольно прозрачные колонии. На
агаре с кровью вырастают влажные колонии зеленовато-серого цвета,
окруженные зеленой зоной, что является результатом перехода гемоглобина в
метгемоглобин. Пневмококки хорошо растут в бульоне с добавлением 0,2%
глюкозы и в бульоне с сывороткой. Рост в жидких средах характеризуется
диффузным помутнением и пылевидным осадком на дне.
|