С курсом факультета повышения квалификации и переподготовки кадров



Pdf көрінісі
бет155/375
Дата31.12.2021
өлшемі2,61 Mb.
#21760
1   ...   151   152   153   154   155   156   157   158   ...   375
Байланысты:
Farmatsevticheskaia biotekhnologiia Moiseev-DV 2020


Часть 2. Частные вопросы биотехнологии. Клеточная биотехнология 
 
 
124
 
 
Метод  С.  Определение  антител  у  морских  свинок.  Готовят  не  менее 
трех разведений с 2,5–5-кратным шагом. Каждой свинке вводят подкожно 
1,0 мл разведения, предназначенного для данной группы животных. Через 
35–42 дня после иммунизации подходящим методом берут образцы крови 
у  каждого  вакцинированного  и  контрольного  животного.  Подходящим 
иммунохимическим методом определяют содержание антител
 
Определение титра антител 
Приведенные ниже твердофазный иммуноферментный анализ (тИФА 
ELISA))  и  Vero-Tecт  являются  примером  иммунохимических  методов, 
признанных подходящими для определения титра антител. 
Определение титра антител в сыворотке морской свинки с помощью 
тИФА. Лунки используют для исследуемых сывороток, отрицательного и 
положительного  контролей.  Покрывают  лунки  планшета  для  тИФА 
100 мкл  раствора  дифтерийноro  анатоксина.  Планшет  оставляют  на  ночь 
при  температуре  4ºС  во  влажной  камере.  На  следующий  день  пластины 
тщательно отмывают промывочным буферным раствором. 
Готовят  подходящие  разведения  отрицательной  и  положительной 
контрольных  сывороток  и  испытуемых  сывороток.  Инкубируют  при 
температуре  37ºС  в  течение  2  ч.  Oтмывают  промывочным  буферным 
раствором.  Готовят  подходящее  разведение  конъюгата  пероксидазы  в 
блокирующем  буферном  растворе  и  прибавляют  по  100  мкл  в  каждую 
лунку.  Инкубируют  при  температуре  37ºС  во  влажной  камере  в  течение 
1 ч. Отмывают планшет промывочным буферным раствором. Прибавляют 
по  100 мкл  субстратногo  раствора  в  каждую  лунку.  Инкубируют  при 
комнатной температуре в темноте в течение 30 мин. Учитывают реакцию 
при длине волны 405 нм. 
Определение титра антител в сыворотке морской свинки с помощью 
Vero-теста. Метод основан на регистрации угнетения метаболизма (1) или 
цитотоксичности  (2)  в  качестве  конечногo  эффекта.  Регистрация  может 
быть  выполнена  путем  микроскопии  клеток  (определение  клеточной 
морфологии) или макроскопически (по изменению цвета). Конечная точка 
метода  может  быть  определена  как  максимальное  разведение  сыворотки, 
которое  защищает  клетки  от  дифтерийногo  токсина.  Активность 
антитоксина  рассчитывается  по  сравнению  с  референтной  сывороткой 
морской свинки или стандартным образцом ВОЗ и выражается в МЕ/мл. 
Метод 1. Дифтерийный  токсин  оказывает  цитопатическое  действие 
(ЦПД) на клетки Vero (клетки почки африканской зеленой мартышки) и их 



Достарыңызбен бөлісу:
1   ...   151   152   153   154   155   156   157   158   ...   375




©emirsaba.org 2024
әкімшілігінің қараңыз

    Басты бет