Литература для студентов Учебная литература для студентов медицинских вузов и медицинских
жүктеу/скачать 31,79 Mb. Pdf көрінісі
|
| 11
Рис. 1. Микроскопы для биологических иссле дований. А — стандартный световой биологический микро скоп серии "Биолам": 1 — основание; 2 — тубусо- держатель; 3 — наклонный тубус; 4 — окуляр; 5 — револьвер; 6 — объективы; 7 — столик; 8 — конден сор с ирисовой диафрагмой; 9 — винт конденсора; 10 — зеркало; 11 — микрометрический винт; 12 — макрометрический винт. Б — трансмиссионный электронный микроскоп с автоматизированной системой обработки изображе ний: 1 — колонка микроскопа (с электронно-опти- ческой системой и камерой дня образцов); 2 — пульт управления; 3 — камера с люминесцентным экраном; 4 — блок анализа изображений; 5 — дат чик видеосигнала. фиолетовые лучи с длиной волны около 0,2 мкм. Разрешаемое расстояние здесь в 2 раза меньше, чем в обычных световых микроскопах, и составляет приблизительно 0,1 мкм (do = 1/ 2 0,2 мкм = 0,1 мкм). Полученное в ультра 12 фиолетовых лучах невидимое глазом изображение преобразуется в видимое с помощью регистрации на фотопластинке или путем применения специ альных устройств (люминесцентный экран, электронно-оптический преоб разователь). Флюоресцентная (люминесцентная) микроскопия. Явления флюоресценции заключаются в том, что атомы и молекулы ряда веществ, поглощая корот коволновые лучи, переходят в возбужденное состояние. Обратный переход из возбужденного состояния в нормальное происходит с испусканием света, но с большей длиной волны. В флюоресцентном микроскопе в качестве ис точников света для возбуждения флюоресценции применяют ртутные или ксеноновые лампы сверхвысокого давления, обладающие высокой яркостью в области спектра 0,25—0,4 мкм (ближние ультрафиолетовые лучи) и 0,4— 0,5 мкм (сине-фиолетовые лучи). Длина световой волны флюоресценции всегда больше длины волны возбуждающего света, поэтому их разделяют с помощью светофильтров и изучают изображение объекта только в свете флюоресценции. Различают собственную, или первичную, и наведенную, или вторичную, флюоресценцию. Любая клетка живого организма обладает собственной флюоресценцией, однако она часто бывает чрезвычайно сла бой. П е р в и ч н о й ф л ю о р е с ц е н ц и е й обладают серотонин, катехолами ны (адреналин, норадреналин), содержащиеся в нервных, тучных и других клетках, после фиксации тканей в парах формальдегида при 60—80 °С (ме тод Фалька). В т о р и ч н а я ф л ю о р е с ц е н ц и я возникает при обработке препара тов специальными красителями — флюорохромами. Существуют различные флюорохромы, которые специфически связыва ются с определенными макромолекулами (акридин оранжевый, родамин, флюоресцеин и др.). Например, при обработке препаратов чаще всего упот ребляется флюорохром акридиновый оранжевый. В этом случае ДНК и ее соединения в клетках имеют ярко-зеленое, а РНК и ее производные — яр ко-красное свечение. Таким образом, спектральный состав излучения несет информацию о внутреннем строении объекта и его химическом составе. Ва риант метода флюоресцентной микроскопии, при котором и возбуждение, и излучение флюоресценции происходят в ультрафиолетовой области спектра, получил название метода ультрафиолетовой флюоресцентной микроскопии. Фазово-контрастная микроскопия. Этот метод служит для получения кон трастных изображений прозрачных и бесцветных живых объектов, невиди мых при обычных методах микроскопирования. Как уже указывалось, в обычном световом микроскопе необходимая контрастность структур дости гается с помощью окрашивания. Метод фазового контраста обеспечивает контрастность изучаемых неокрашенных структур за счет специальной кольцевой диафрагмы, помещаемой в конденсоре, и так называемой фазо вой пластинки, находящейся в объективе. Такая конструкция оптики мик роскопа дает возможность преобразовать не воспринимаемые глазом фазо вые изменения прошедшего через неокрашенный препарат света в измене ние его амплитуды, т. е. яркости получаемого изображения. Повышение контраста позволяет видеть все структуры, различающиеся по показателю преломления. Разновидностью метода фазового контраста является метод жүктеу/скачать 31,79 Mb. Достарыңызбен бөлісу:
|