В. В. Зверева, М. Н. Бойченко



Pdf көрінісі
бет39/180
Дата12.09.2023
өлшемі4,99 Mb.
#106913
1   ...   35   36   37   38   39   40   41   42   ...   180
Байланысты:
микробиология т-1, Зверев

3.3. Культивирование вирусов 
Вирусы культивируют для лабораторной диагностики вирусных инфекций, изучения 
патогенеза и иммунитета при вирусных инфекциях, а также для получения вакцин и 
диагностических препаратов. Поскольку вирусы являются облигатными внутриклеточными 
паразитами, их культивируют в организме лабораторных животных, развивающихся куриных 
эмбрионах и других птиц, а также на культурах клеток (тканей). 
Присутствие вируса в исследуемом материале определяют с помощью методов индикации 
и идентификации. 
Индикация вирусов, 
т.е. неспецифическое обнаружение факта инфицирования, 
основано на выявлении биологических свойств вирусов и особенностей их взаимодействия с 
чувствительными клетками. 
Идентификация 
означает установление вида или типа вируса. Она 
осуществляется в основном с помощью иммунных реакций или молекулярногенетических 
методов (ПЦР и др.). 
Вирусы можно культивировать в организме восприимчивых к ним лабораторных животных 
(белые мыши, хомячки, кролики, обезьяны и др.), которых заражают вируссодержащим 
материалом различными способами в зависимости от тропизма вирусов (подкожно, 
внутримышечно, интраназально, интрацеребрально и т.д.). Наличие вирусов выявляют по 
развитию у животных клинических проявлений заболевания, патоморфологическим изменениям 
органов и тканей, а также на основании реакции гемагглютинации (РГА) с вируссодержащим 
материалом. РГА основана на способности многих вирусов склеивать (агглютинировать) 
эритроциты своими гликопротеиновыми шипами (гемагглютининами). 
Другой моделью культивирования вирусов являются куриные эмбрионы (5-12-дневные), 
которых заражают исследуемым материалом в различные полости и ткани зародыша. Таким 
образом можно культивировать вирусы гриппа, герпеса, натуральной оспы и др. Свидетельством 
репродукции вирусов в куриных эмбрионах являются специфические поражения оболочек и тела 
эмбриона (оспины, кровоизлияния), гибель эмбриона, положительная РГА с вируссодержащей 
жидкостью, полученной из полостей зараженного зародыша. 
Часто вирусы культивируют на культуре клеток. Метод культур клеток был впервые 
разработан в 1949 г. Дж. Эндерсом и соавт., получившими за разработку техники культивирования 
вируса полиомиелита Нобелевскую премию в 1954 г. Изолированные клетки, полученные из 
различных органов и тканей человека, животных, птиц и других биологических объектов, 
размножают на искусственных питательных средах в специальной лабораторной посуде. Широко 
распространены культуры клеток из эмбриональных и опухолевых (злокачественно 
перерожденных) тканей, обладающих по сравнению с нормальными клетками взрослого 
организма более активной способностью к росту и размножению. 
Культуры клеток обычно состоят из одного-двух основных типов клеток. Так, фибробласты 
имеют вытянутую форму, тогда как эпителиальные клетки имеют многоугольную форму. 
Культуру клеток выращивают с соблюдением оптимальной температуры (36-38,5 °С) роста 
клеток и асептических условий в специальной лабораторной посуде (пробирки, флаконы, матрасы) 
или в реакторах для получения биотехнологической продукции. При этом используют сложную 
питательную среду Игла, среду 199 и другие среды, содержащие необходимые для роста клеток 
аминокислоты, минеральные соли, витамины, глюкозу, сыворотку крови животных или человека, 
буферные растворы для поддержания стабильного рН. Для подавления роста посторонней 
микрофлоры в среды для культивирования клеток добавляют антибиотики. 
Различают однослойные, суспензионные и органные культуры клеток. Клетки 
однослойной 
культуры клеток 
прикрепляются и размножаются на поверхности лабораторной посуды в виде 


70 
монослоя. Они получили наибольшее применение в вирусологии. Клетки 


Достарыңызбен бөлісу:
1   ...   35   36   37   38   39   40   41   42   ...   180




©emirsaba.org 2024
әкімшілігінің қараңыз

    Басты бет