124
Опосредованная транскрипцией амплификация
рРНК используется для диагностики
смешанных инфекций. Этот метод основан на обнаружении с помощью молекулярной
гибридизации амплифицированных рРНК, специфичных для определенного вида бактерий.
Исследование проводят в три этапа:
• амплификация пула рРНК на матрице выделенной из исследуемого материала ДНК при
помощи ДНК-зависимой РНКполимеразы;
• гибридизация накопленного пула рРНК с комплиментарными видоспецифическими
рРНК олигонуклеотидами, меченными флюорохромом или ферментами;
• определение продуктов гибридизации методами денситометрии, ИФА.
Реакцию проводят в автоматическом режиме в установках, в которых одномоментное
определение рРНК, принадлежащих различным видам бактерий, достигается разделением
амплифицированного пула рРНК на несколько проб, в которые вносят для гибридизации
комплементарные видоспецифическим рРНК меченые олигонуклеотиды.
Достарыңызбен бөлісу: