Часть 3. Частные вопросы биотехнологии. Микробная биотехнология
242
19.5 Методы оценки активности ферментов Активность фермента выражается в стандартных единицах
активности. Стандартная единица активности – эта величина для любого
фермента обозначает то количество его, которое катализирует превращение
1 мкмоль субстрата за 1 мин при заданных регламентированных условиях.
Эта единица обозначается буквой Е или U.
Условия при установлении активности фермента: температура 30°С;
определение активности по начальной скорости реакции, когда
концентрация субстрата достаточна для насыщения фермента и
соответствует кинетике реакции нулевого порядка. Концентрации
субстрата, фермента и рН выбирают оптимальными для каждого фермента.
Если количество прореагировавшего субстрата очень мало или
велико, допускается выражение результатов в миллиединицах (мЕ или мU)
и килоединицах (кЕ и кU).
Содержание фермента в лекарственном средстве условно выражается
в стандартных единицах активности фермента на 1 мл ферментного
раствора или 1 г средства. Активность ферментного средства выражается в
микромолях субстрата, прореагировавшего в присутствии 1 мл
ферментного раствора или 1 г средства в заданных условиях за 1 мин. Число
микромолей и будет равно числу стандартных единиц. Если фермент
гомогенен, то его удельная активность может быть выражена в стандартных
единицах на 1 мг фермента. Если же средство содержит балласт в виде
неактивного белка, его удельная активность выражается в стандартных
единицах на 1 мг белка в ферментном средстве.
Молекулярная активность представляет собой число миллимолей
субстрата или эквивалентов затронутой реакцией групп, прореагировавших
в течение 1 мин с 1 ммоль фермента при оптимальных концентрациях
субстрата, или число стандартных единиц, содержащихся в 1 ммоль
фермента.