разделены фрагменты, размеры которых составляют от 2 до 50 000
оснований. После электрофореза фрагменты смывают с агарозы при
помощи подходящих методов.
Выделенные после электрофореза из агарозных гелей фрагменты
ДНК можно предварительно подвергнуть секвенированию, т. е. определить
в них нуклеотидную последовательность. Для этого используют
химический и ферментативный методы секвенирования.
Химический метод основан на получении меченных радиоактивным
фосфором (Р
32
) фрагментов и удалении из этих фрагментов одного из
оснований с последующим учетом результатов радиоавтографии.
Ферментативный метод основан на том, что в конец анализируемого
фрагмента вводят нуклеотид, используемый затем в синтезе разных
фрагментов in vitro, анализируемых на нуклеотидную последовательность
электрофоретически. Для изучения специфических последовательностей
нуклеотидов в молекуле ДНК используют также гибридизацию ДНК-ДНК,
РНК-РНК, ДНК-РНК.
II этап. Фрагменты рекомбинантных ДНК и вектора, полученные
после действия рестриктаз и содержащие определенные гены, «сшивают»
одним из трех основных методов, в зависимости от того, какие концы
имеют фрагменты – «тупые» или «липкие».
