С курсом факультета повышения квалификации и переподготовки кадров
жүктеу/скачать 2,61 Mb. Pdf көрінісі
|
Часть 3. Частные вопросы биотехнологии. Микробная биотехнология 286 агаре (суточная культура) и приготавливают суспензию, которую стандартизируют по единицам мутности (МакФарланду) в пробирке. Отбирают определенный объем суспензии из пробирки и засевают микроорганизмы на чашку Петри при подходящей температуре, например, при 48–50ºС для вегетативных форм и при 65–70ºС при использовании суспензии спор. Количество суспензии микроорганизмов выбирают таким образом, чтобы образовывались четко определенные зоны ингибирования требуемого диаметра при концентрациях антибиотика, используемых в определении. Чашки хранят таким образом, чтобы не происходило заметного роста или гибели микроорганизмов до их использования, а поверхность среды была сухой к моменту использования. Используя растворитель и буферный раствор, указанный в таблице ГФ РБ, готовят растворы стандартного образца антибиотика и испытуемого антибиотика, имеющие известные концентрации и предположительно равные активности. Для оценки достоверности количественного определения используют не менее трех доз стандартного образца и трех доз испытуемого антибиотика, имеющих равные предполагаемые активности. Растворы наносят на поверхность среды, например, в стерильных цилиндрах из фарфора, нержавеющей стали или другого подходящего материала, или в лунки, сделанные в aгape. В каждый цилиндр или лунку должны быть помещены равные объемы раствора. Рекомендуемая последовательность внесения стандартного и испытуемого образцов в цилиндры или лунки каждой чашки: первыми вносятся растворы с малой концентрацией, затем со средней концентрацией, последними вносят растворы с большими концентрациями. Все растворы стандартного и испытуемого образцов вносят в цилиндры или лунки одной чашки Петри таким образом, чтобы растворы с большими концентрациями не соприкасались между собой. Чашки инкубируют при подходящей температуре около 16–20 ч. Чашки могут выдерживаться до инкубации при комнатной температуре или, если необходимо, при температуре 4ºС в течение определенною промежутка времени, обычно от 1 до 4 ч для протекания диффузии, что уменьшает эффекты вариаций временных интервалов между нанесением растворов. Измеряют диаметры (с точностью не ниже 0,1 мм) или площади кольцевых зон ингибирования (с соответствующей точностью). |