Техника гистологического исследования
жүктеу/скачать 23,32 Kb.
|
1 2
Байланысты:гистотехника перевод-1
| Целлоидинге құю. Целлоидин - арнайы дайындалған целлюлоза. Сусыздандырудан кейін абсолютті спирттен алынған үлгі абсолютті спирт пен сусыз эфирдің тең бөліктерінің қоспасына, содан кейін әрқайсысында бірнеше күн ішінде 2%, 4% және 8% целлоидин ерітінділеріне ауыстырылады. Әрі қарай, материал қалың целлоидинге ауыстырылады, ол хлороформ буларында тығыздалады. Блоктар қатайтылған целлоидиннен кесіліп, ағаш текшелерге жабыстырылады және сақтау үшін 70% спиртте орналастырылады. Бұл құюдың теріс нәтижелері-тығыздау ұзақтығы (10-15 тәулік), кесінділерді алу мүмкіндігі 7-8 мкм-ден жұқа, сериялық бөлімдерді алудың қиындығы.
Кесінділер жасау. Кесінділерді алу үшін арнайы құрылғы – микротом қолданылады. Онда үш негізгі бөлік бар: объект ұстағыш (ағаш текшені блокпен бекіту үшін); микрометриялық механикалық жүйе (объектіні ұстағышты артқы өлшемге беру үшін); микротомды пышақ ұстағыш. Микротомдардың әртүрлі конструкциялары бар. Арнайы салқындатқыш үстелдермен жабдықталған микротомдар (мұздатқыш микротомдар) фиксатордың әсерін болдырмау қажет болған жағдайларда, мысалы, гистохимиялық зерттеулерде қолданылады. Қалыңдығы 10-20 мкм немесе одан да көп кесінділер осы типтегі микротом үшін алынады. Мұздату әдісі патологиялық тәжірибеде және клиникада жедел диагностикалық әдістердің бірі ретінде кеңінен қолданылады. Мұздатылған кесінділер суға немесе бірден шыны заттарға жіберіледі, онда олар ериді және түзетіледі. Кесінділерді бояу. Гистологиялық тәжірибеде қолданылатын бояғыштар химиялық қасиеттері бойынша үш топқа бөлінеді: негізгі, қышқыл және бейтарап. Негізгі бояғыштар (азур II, гематоксилин, кармин және т.б.) бояғыш негіздердің тұздары болып табылады. Негізгі бояғыштармен таңдамалы түрде боялған гистологиялық құрылымдар базофильді деп аталады. Негізгі бояғыштар жасуша ядроларын бояйды. Қышқыл бояғыштар (эозин, қышқыл фуксин және т.б.) әдетте цитоплазманы және көптеген жасушалық емес құрылымдарды бояйды. Қышқыл бояғыштармен боялған гистологиялық құрылымдар оксифильді деп аталады. Бейтарап бояғыштар - бояғыш негізбен бояу қышқылының тұздары. Химиялық компоненттермен байланысуға немесе оларда еруге қабілетті бояғыштар бар (мысалы, судан III липидті тамшыларда ериді). Гистологиялық құрылымдардың белгілі бір бояғыштармен белгілі бір жолмен бояу қабілеті тинкториалды қасиеттер деп аталады. Бояғыштарға жауап бермейтін құрылымдар хромофобты деп аталады. Боялатын құрылымдар хромофильді (базофильді, оксифильді). Кейбір жағдайларда гистологиялық құрылымдар жауап беретін немесе жауап бермейтін бояғыштың атауы тинкториальды қасиеттерді сипаттау үшін қолданылады. Мысалы, пиронинофильді - пиронинмен боялған, суданофобты - суданмен боялмайды және т. б. Кейде белгілі бір химиялық құрамы бар құрылымдар бояу кезінде бояғыштың түсін өзгертеді. Мұндай тинкториалды қасиет метахромазия деп аталады. Парафинді кесінділерді гематоксилинмен және эозинмен бояу әдістемесі 1. Кесінділерді заттық шыныға жабыстырыңыз. 2. Кесінділерді парафиннен ксилолдың үш бөлігінде 4-5 минуттан тазартыңыз. 3. Кесіндіні ксилолдан 2 -3 минут ішінде абсолютті спирттегі тазартыңыз. 4. Кесінділерді 2-3 минут ішінде төмен концентрациялы спирттер (96%, 70%) және дистилденген суды пайдалану арқылы ылғалдандырыңыз. 5. 2-3 минут ішінде гематоксилиннің сулы ерітіндісінде бояңыз. 6. Алдымен ағын сумен, содан кейін дистилденген сумен 2-5 минут шайыңыз. 7. Эозиннің сулы ерітіндісінде 0,5-мин бояңыз. 8. Дистилденген суда 0,5 - 1 минут шайыңыз. 9. Жоғары концентрациядағы спирттерде (70%, 96%, 100%) сусыздандыру 1-2 мин. 10. Карбол - ксилол мен ксилолда 2-3 минут ішінде ағартыңыз. 11. Боялған кесінділерді бальзамға салыңыз. Кесінділерді консервілеу. Консервілеу ортасы ретінде қылқан жапырақты шайырлар – канадалық, шырша бальзамы, сондай-ақ мөлдір қатайтатын синтетикалық орта қолданылады. жүктеу/скачать 23,32 Kb. Достарыңызбен бөлісу:
|
1 2