ВЕТЕРИНАРИЯ
_____________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________
3
УДК 619:616.98:586
ДИАГНОСТИЧЕСКАЯ ЦЕННОСТЬ ЛАБОРАТОРНЫХ МЕТОДОВ ПРИ
ХЛАМИДИОЗЕ КРУПНОГО РОГАТОГО СКОТА
Пионтковский В.И. – д.вет.н., профессор кафедры ветеринарной медицины Костанайского
государственного университета им. А.Байтурсынова
Мустафин М.К. – д.вет.н., директор КОФ РГП «Республиканская ветеринарная
лаборатория» КВК в АПК МСХ РК
Сухов С.В. – магистрант специальности 6М120100 – Ветеринарная медицина
Костанайского государственного университета им. А.Байтурсынова
Баисеев Г.А. – заведующий отделом диагностики КОФ РГП «Республиканская ветеринарная
лаборатория» КВК в АПК МСХ РК
Түйін
Жұмыста материалдардағы Костанай облысындағы iрi қараның хламидиоз бойынша iндет
жағдайы айқындалған, диагностиканың лабораториялық әдiстерiнiң салыстырмалы нәтижелерi
келтiрiлген, бұл ауруға диагностиканың нәтижелi және перспективалы әдiстерi ұсыныс жасаған.
Аннотация
В материалах работы освещена эпизоотическая ситуация по хламидиозу крупного
рогатого скота в Костанайской области, приведены сравнительные результаты лабораторных
методов диагностики, предложены результативные и перспективные методы диагностики
этого заболевания.
Summary
In the materials of the epizootic situation covered by chlamydia cattle in Kostanai region, shows
comparative results of laboratory diagnostic methods are proposed efficient and promising methods for
diagnosing this disease.
Хламидиозы животных – группа широко
распространенных контагиозных болезней среди
всех видов млекопитающих и птиц, наносящих
значительный экономический ущерб различным
отраслям животноводства,
вызывая
гибель
животных, аборты, рождение мертвого или
нежизнеспособного приплода, патологию вос-
производительных органов, полиартриты, кера-
токонъюнктивиты, поражают органы пищеваре-
ния, дыхательную и нервную системы. Глобаль-
ная распространенность возбудителей хлами-
диозов в природе среди диких животных и
особенно птиц, являющихся резервуаром этой
инфекции, представляет постоянную угрозу
сельскохозяйственным, домашним животным,
птицам, а также людям, в том числе профессио-
нально не занятым в сельском хозяйстве. Эпи-
зоотический процесс, из-за широко распростра-
ненного резервуара инфекции, является практи-
чески неконтролируемым [1,2,3,4].
Характерной особенностью хламидиозов,
значительно усложняющей эпизоотический и
эпидемиологический надзор за ними, является
часто хроническое, со стертой клинической кар-
тиной или латентным течением. Следовательно,
в системе
проведения ветеринарно-санитарных
мероприятий по современной профилактике,
лечению хламидиозов животных и людей ключе-
вое значение имеет ранняя и достоверная диаг-
ностика разных форм течения и клинического
проявления болезни.
В Костанайской области хламидиозы реги-
стрируются на протяжении около трех десяти-
летий у овец в виде хламидиозного (вирусный,
эпизоотический) аборта. В 2005 и 2006 годах это
заболевание впервые установлено среди свиней
в АО «Заря» Мендыкаринского, а также среди
крупного рогатого скота в ТОО «Садчиковское» и
«Ак-Кудук» Костанайского районов. В 2007-2011
годах хламидиоз крупного рогатого скота значи-
тельно расширил свои границы. Его, помимо наз-
ванных сельхозформирований, выявили в ТОО
«Викторовское», «Азия-Алтын-2000», им. К.Марк-
са и многих других, в том числе и племенных.
Заболевание проявляется в различных клини-
ческих формах и наносит значительный эконо-
мический ущерб. Хламидиоз имеет также рас-
пространение среди плотоядных животных и
птиц [5,6,7].
Цель наших исследований – выявить рас-
пространение хламидиоза крупного рогатого
скота в сельхозформированиях Костанайской
области, определить диагностическую ценность
лабораторных методов при этом заболевании.
Диагноз на хламидиоз крупного рогатого
скота устанавливали комплексно на основании
анализа эпизоотологических, клинических, серо-
логических и бактериологических исследований
с учетом методических указаний по лабора-
торным исследованиям и современной класси-
фикации хламидиозов животных [8,9,10].
Серологические исследования (РСК или
РДСК) с хламидиозным антигеном проводили по
общепринятой методике. Для микроскопического
метода исследования готовили мазки-отпечатки,
окрашивали по Циль-Нильсену в модификации
ВЕТЕРИНАРИЯ
_____________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________
4
Стемпа, по Макиавелло, по Романовскому-
Гимзе. Окрашенные и высушенные препараты
просматривали в световом микроскопе под им-
мерсионным
объективом
(Модель
CX2IFSI
производство Tokyo, Japan) с выходом на экран.
Фотографирование проводили фотокамерой к
микроскопу - 2Mpixels.
Для диагностики хламидиоза животных
методом полимеразной цепной реакции (ПЦР)
применяли
тест-систему
«Хла-Ком»
(ФГУ
ЦНИИЭ Роспотребнадзора). Применение ком-
плекта реагентов для выделения ДНК «ДНК-сорб
В» проводили согласно прилагаемой инструкции.
В ходе выполнения работы (2005-2011гг.)
проведено и проанализировано свыше 655,0
тысяч серологических исследований сыворотки
крови крупного рогатого скота. Контрольно-диаг-
ностическому убою подвергнуто 14 голов круп-
ного рогатого скота. Туши, внутренние органы и
лимфатические узлы животных подвергали тща-
тельной ветсанэкспертизе, определяли характер
и степень поражений, а биоматериал от них ис-
следовали лабораторными методами. Бактерио-
логическому и биологическому исследованиям
патологического и биологического материала от
абортированных плодов, мертворожденных и
погибших телят, сперма и препуциальная слизь
быков-производителей,
воспалительный
экс-
судат из грудной и брюшной полостей и др. под-
вергнуто 1301 образец (таблица). 88 образцов
био- и патматериала исследовали методом ПЦР.
Для постановки биологической пробы исследо-
вали 50 – 6-7 дневных куриных эмбрионов (КЭ),
76 морских свинок. Заражение КЭ проводили в
желточный мешок в дозе 0,2 мл, а морских
свинок – интраторакально (в грудную полость)
или внутрибрюшинно в дозе 0,5 мл.
Из таблицы следует, что из 655,5 тысяч
серологических исследований сыворотки крови
крупного рогатого скота, выделено реагирующих
4,18 тысяч или 0,64% (колебания от 0,15 до
1,37%). Из 1301 образцов био- и патматериала,
подвергнутых
бактериологическому
исследо-
ванию, в 159 получены положительные резуль-
таты, что составило 12,22%. Из 88 образцов пат-
материала от крупного рогатого скота, исследо-
ванного по ПЦР, в 30 (34,1%) получены положи-
тельные результаты. Отрицательные случаи
результатов по ПЦР исключены и другими мето-
дами исследований. Биопробу провели на кури-
ных эмбрионах, а затем микроскопировали окра-
шенные мазки из желточной оболочки на
наличие элементарных телец, которые обнару-
жили в 100%-х случаях. В 76 случаях биопробу
проводили на беременных морских свинках, в 73
образцах получили положительные результаты,
что составляет 96,0%.
Особо необходимо подчеркнуть результа-
тивность
микроскопического
исследования
мазков из экссудатов грудной и брюшной
полостей абортированных плодов, мертворож-
денных и павших телят, а также от морских
свинок, использованных для постановки био-
пробы. Из исследованных 63 мазков из воспа-
лительных экссудатов в 62 из них или 98,4%
получены положительные результаты и в 79%
(64 из 81) - при микроскопии образцов из парен-
химатозных органов.
Из результатов обобщенных исследований
следует, что критерием диагностики хламидиоза
крупного рогатого скота служит выявление цито-
плазматических
включений
(элементарных
телец, см. рисунок) в образцах био- и патмате-
риала, а также в грудном и брюшном экссудате,
паренхиматозных органах морских свинок и кури-
ных эмбрионах (мазки из желточной оболочки)
при постановке биологической пробы. Под обыч-
ным микроскопом элементарные тельца имеют
вид точечных образований. А это значит, что
наиболее чувствительным, но и самым трудоем-
ким и перспективным методом лабораторной
диагностики, являются бактериологические ис-
следования.
При лабораторной диагностике хламидио-
зов следует учитывать сроки забора и доставки
био - и патматериала в лабораторию. Кроме
того, при микроскопировании окрашенных маз-
ков-отпечатков хламидии сходны с бруцеллами
(коккоподобные одиночные, парные или мелкие
группы микроорганизмов). В подобных случаях
необходим дифференциальный диагноз – окрас-
ка по Козловскому, Шину, рост на питательные
средах – мясо-пептоный печеночный бульон,
мясо-пептоный
печеночно-глюкозноглицерино-
вый агар, среды с добавлением глицерина,
картофельный агар и др.
Хламидии на питательных средах не
растут, а культивируются только в развиваю-
щихся куриных эмбрионах, куриных фиброблас-
тах, тестикулах ягнят, Hep-2 и др.
Таким образом, для раннего и достовер-
ного обнаружения возбудителя хламидиоза при
разных
формах
клинического
проявления
болезни и постановки окончательного диагноза,
мы апробировали целый ряд диагностических
тестов - серологические исследования (РСК),
методы прямого выявления хламидий – непо-
средственные (прямые) микроскопические ис-
следования по выявлению элементарных телец
в окрашенных разными способами мазках из
паренхиматозных органов абортированных и
мертворожденных плодов, соскобов из прямой
кишки, спермы и препурциальной слизи быков,
воспалительных экссудатов грудной и брюшной
полостей.
ВЕТЕРИНАРИЯ
_____________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________
6
а
б
в
Рисунок 1 – Элементарные тельца в грудном (а), в брюшном (б) экссудатах и в печени морской
свинки (в). Окраска по Стемпу. х1350
Абсолютная результативность получена
при биопробе на куриных эмбрионах и микрос-
копии мазков из желточной оболочки КЭ.
Высокая результативность (98,4%) получена при
непосредственной
микроскопии
окрашенных
мазков из воспалительных экссудатов грудной и
брюшной полостей абортированных, мертворож-
денных плодов телят, желточной оболочки зара-
женных КЭ и морских свинок. В 96% получены
положительные результаты при проведении
биологической пробы на беременных морских
свинках и в 79% - при исследовании образцов
из паренхиматозных органов.
Выводы:
1. В сельхозформированиях Костанайской
области хламидиоз имеет место среди овец,
крупного рогатого скота, свиней, птиц и плотояд-
ных.
2. Из лабораторных методов диагностики
хламидиоза высокая результативность получена
при постановке биопробы на куриных эмбрионах,
беременных морских свинках и непосредствен-
ной прямой микроскопии окрашенных мазков из
образцов воспалительного экссудата грудной и
брюшной полостей, а также паренхиматозных
органов от абортированных, мертворожденных и
павших телят.
3. Для оперативной постановки диагноза
на хламидиоз лабораторными
методами предла-
гаем метод непосредственной микроскопии
образцов – окрашенных мазков из экссудата
брюшной и грудной полостей абортированных
плодов, мертворожденных и павших телят. Эти
методы легко выполнимы в любом районном
или городском филиале Костанайского област-
ного филиала РГП «Республиканская ветеринар-
ная лаборатория», надежны и перспективны.
4. Для прогнозирования эпизоотического
процесса при хламидиозах, в том числе и хлами-
диоза крупного рогатого скота, необходимы
регулярные или периодические исследования
животных и птиц синантропной фауны, обитаю-
щих многочисленными стаями вблизи животно-
водческих помещений или непосредственно в
них и являющихся резервуаром возбудителей
хламидиозов.