Адаптациялық және репарациялық реакциялардың жиынтық көрінісі


 Анаэробты бактериялардың таза дақылын бөліп алу



Pdf көрінісі
бет4/5
Дата14.10.2023
өлшемі148,5 Kb.
#114276
1   2   3   4   5
Байланысты:
Мммим

2.3. Анаэробты бактериялардың таза дақылын бөліп алу
Анаэробты микрофлораны оқшаулау үшін дақылдар спора түзетін
(клостридиялар) және спора түзбейтін (вейлонелла, бактериоидтар,
пептококктар) қатаң анаэробты жағдайда өндіріледі. Бастапқы егу байыту
орталарында (тиогликоль,
Китта-Тарозци) жасалады, содан кейін қатты қоректік орталарда
субкультураланады:
Петри табақшаларында қантты қан агары, қантты қоректік агардың
жоғары бағанасында немесе оқшауланған колонияларды алу үшін басқа
орталарда.
Дақылдарды анаэробты жағдайда инкубациялаудан кейін алынған
бактериялық 
колониялардан 
жағындылар 
дайындалады, 
боялады,
микроскопиялық әдіспен, содан кейін таза дақылды бөліп алу үшін Китт-
Тароцци ортасына және агар ортасына субкультураланады.
Спора түзетін анаэробты бактерияларды (клостридияларды) бөліп
алған кезде бастапқы екпелерді сынама материалында болуы мүмкін бөгде
микрофлораның вегетативті жасушаларын жою үшін 80 С температурада код
ваннасында 20 минут қыздырады.
2.4 Анаэробтарды өсіру әдістері
Анаэробты бактериялар оттегі бар жерде өсе алмайды. Анаэробты
бактерияларды өсіру үшін оттегісіз орта жасау керек. Әдетте қоректік ортаға
тотықсыздандырғыштар қосылады немесе қоршаған ортадағы бос оттегі
тотығу-тотықсыздану потенциалын азайту үшін физикалық және химиялық
әдістермен жойылады. Көпіршікті ет ортасы, натрий тиогликолаты ортасы,
сиыр жүрегі мен миы инфузиялық ортасы және т.б. Көптеген жиі
қолданылатын анаэробты өсіру әдістері бар, оларды нақты жағдайға сәйкес
таңдауға болады.
Қасиеттері бойынша:
1. Физикалық әдістер арнайы құрылғыларда – анаэростаттарда вакуум
жасауға негізделген. Кейде олардағы ауа басқа газбен ауыстырылады,
мысалы, СО2. Егер анаэробтарды қант агарының колоннасының тереңдігінде
немесе Вильсон-Блэр ортасында өсіріп, пробиркаларға балқытылған күйде
құйып, 43°С дейін салқындаса, оттегінің қоректік ортаға жетуіне кедергі
болуы мүмкін. Вейон-Вигнал әдісі бойынша егілген балқытылған және
салқындатылған агарды екі ұшын тығыздайтын шыны түтіктерге жинайды.


2. Химиялық әдістер зерттелетін материалды тығыз ортада өсіру
кезінде пирогаллол және сілті сияқты химиялық заттарды эксикаторға
салудан тұрады, олардың арасындағы реакция оттегінің сіңірілуімен жүреді.
Сұйық қоректік ортаға әртүрлі қалпына келтіретін заттарды қосуға болады:
аскорбин немесе тиогликоль қышқылы.
3. Биологиялық әдіс аэробтар мен анаэробтарды тығыз қоректік ортада
герметикалық жабылған Петри табақшаларында бір мезгілде өсіруге
негізделген. Алдымен ортаның бір жартысына себілген аэробтарды өсіру
арқылы оттегі сіңіріледі, содан кейін екінші жартысына себілген
анаэробтардың өсуі басталады. Анаэробтарды өсіру үшін ең қолайлысы
арнайы Китт-Тарозци ортасы болып табылады. Оған пробиркаларға 10-12 мл
мөлшерінде құйылатын қант BCH және қайнатылған паренхималық
мүшелердің бөліктері кіреді. Қолданар алдында Китт-Тарозци ортасы ондағы
еріген оттегін кетіру үшін су моншасында қайнатылады. Ортадан жоғарыдан
стерильді вазелин майымен құйылады. Анаэробтардың айтарлықтай өсуі
(лайлану) егу мөлшеріне байланысты 48 сағаттан кейін немесе одан да көп
уақыт өткеннен кейін байқалуы мүмкін.
Құрылғылар арқылы:
1. Анаэробты цистерна әдісі анаэробты цистернада өсіруге болатын
үлгінің 
пластина 
немесе 
сұйық 
орта 
пробиркасына 
егу 
үшін
қолданылады.Бактериялар өсіріледі.
2. Анаэробты қап (Био-қап) - анаэробты бактерияларды өсіру үшін
пластикалық қапшықта анаэробты орта жасау. Пластикалық қапшық мөлдір
және ауа өткізбейтін, оның құрамында газ түзетін түтік (натрий боргидриді
және 5% лимон қышқылы ампуласы бар қатты натрий бикарбонаты), метилен
көк индикатор түтігі, палладий катализаторы түтігі және кептіргіш бар.
Егілген пластинаны қойғаннан кейін, қаптағы ауаны сығып көріңіз, содан
кейін қапты жабыңыз. Алдымен газ тудыратын түтікшені сындырыңыз,
содан кейін метилен көк индикаторлық түтікшені сындырыңыз және атау
қалтасынан жарты сағат ішінде газсыз орта жасаңыз. Егер мутация болмаса,
бұл қаптың анаэробты күйге жеткенін және инкубациялауға болатынын
білдіреді.
3. Анаэробты қолғап қорабы (Anaerobie қолғап қорабы) әлемдегі
анаэробты бактерияларды өсіруге арналған ең жақсы құралдардың бірі болып
табылады. Бұл қораптың алдында плексигласстан жасалған мөлдір панелі бар
жабық үлкен металл қорап, ал тақтаға екі қолғап орнатылған, оны қолғаптар
арқылы қорапта басқаруға болады, сондықтан аты. Жәшіктің бүйірінде
айырбастау бөлмесі бар, ішкі және сыртқы екі есігі бар, ішкі есік қорап
арқылы алдымен жабылады. Заттарды қорапқа салу үшін алдымен сыртқы
есікті ашыңыз, оны айырбастау бөлмесіне салыңыз, анаэробты күйге жету
үшін ауа шығару және желдету (H2, CO2, N2) үшін сыртқы есікті жабыңыз,
содан кейін қолыңызды қолғапқа салыңыз. айырбастау бөлмесінің есігін
ашып, заттарды қою үшін Қорапқа жылжытыңыз және ішкі есікті жабыңыз.
Қорапта анаэробты күй сақталады, бұл сонымен қатар палладий катализінде
суды тотықтыру және синтездеу үшін зарядталған газдағы сутегін және
қораптағы


қалдық ақшаны пайдалану принципі болып табылады. Қораптың
температурасын реттеуге болады.Ол инкубатор немесе оған бекітілген
инкубатор.Сонымен қатар анаэробты бактериялардың колонияларын оңай
бақылау үшін оны бөлшектеуші микроскопқа салуға болады.Бұл анаэробты
қорап кең ауқымды культураны зерттеуге жарамды. Негізді редукцияға
дейінгі және анаэробты стерильділік сынақтарына қоюға болады. Металл
қатты қабырғалы анаэробты қораптың ауаны шығаруы, анаэробты орта және
температурасы барлығы автоматты түрде реттеледі.
4. McIntosh-Fildes анаэробты құмырасы: Бұл анаэробиоздың ең көп
қолданылатын және сенімді әдісі (3-ші түсті сурет). Ол бұранданың
көмегімен ауа өткізбейтін етіп бекітетін металл қақпағы бар шыны немесе
металл банкадан тұрады. Қақпақтың бір кіріс түтігі және басқа шығаратын
түтігі бар. Шығару түтігі вакуумдық сорғыға қосылған, оның көмегімен ауа
банкадан шығарылады. Кіріс түтігі сутегі беру көзіне қосылған. Қақпақта
электр желісіне қосылуға болатын екі электр терминалы бар. Қақпақтың
астыңғы жағында ауадағы қалдық оттегімен сутегінің қосындысын
катализдейтін катализатор (мысалы, палладиймен қапталған алюминий
тотығы түйіршіктері) бар. Бұл әдіс толық анаэробиозды қамтамасыз етеді.
5. Оттегінің биологиялық тұтыну әдісі: организмдерді (көбінесе
өсімдіктерді) оттегін тұтыну және бактериялардың өсуі үшін көмірқышқыл
газын өндіру үшін ауа өткізбейтін контейнерге салу. Мен көрген жоқпын.
6. Пироморфты қышқыл әдісі: таза шыны слайдқа дәке немесе сүзгі
қағазын жағыңыз, пироморф қышқылын біркелкі сеуіңіз, содан кейін
NaHCO3 ұнтағына немесе NaOH ерітіндісіне араластырыңыз және
бактериялар егілген пластинаны тез үстіне төңкеріп қойыңыз, шеттерін
балқытылған ақ балауызбен жабыңыз. жабық кеңістік жасаңыз. Пироген
қышқылы мен сілті арасындағы реакциядан кейінгі оттегінің шығыны. Бұл
әдіс қатаң анаэробты емес және қарапайым анаэробты бактерияларды өсіру
үшін қолданылады. Clostridium сияқты.
7. Blister Meat Medium: Бұл арнайы жабдықты қажет етпейтін
анаэробты өсіру әдісі. Көпіршіктер мен сорпаны үлкен пробиркаларға салып,
сұйық бетін анаэробты орта жасау үшін вазелинмен жабады.Анаэробтардың
оқшауланған колонияларының өсуін Петри табақшаларына құйылған қанды-
қантты агардың бетіне зерттелетін материалды електен өткізу арқылы алуға
болады. Егістен кейін шыныаяқтар анаэростатта орналастырылады.
Концентрациясы төмендеген сынақ материалын биік агар бағанасына егуге
болады. Анаэробтардың түзілген жеке колонияларын өсу орнында
пробирканы аралау арқылы бөліп алады. Биомассаның едәуір мөлшерін алу
үшін анаэробтар колониялары Китт-Тарозци ортасында скринингтен өтеді.
Глюкоза анаэробтар үшін энергия көзі ретінде пайдаланылады, оны қоректік
ортаға қосу міндетті болып табылады.




Достарыңызбен бөлісу:
1   2   3   4   5




©emirsaba.org 2024
әкімшілігінің қараңыз

    Басты бет