Активность цитоплазматической супероксиддисмутазы чувствительный показатель состояния антиоксидантной системы печени и мозга крыс
жүктеу/скачать 465,07 Kb. Pdf көрінісі
|
| Сирота и др.
65 в 0,05 М фосфатном буфере, рН 7,5, содержащим 1 мМ EDTA, 0,16 мМ NADPH, 10 мкл супернатанта гомогената печени или 100 мкл супернатанта гомогената мозга в течение 5 мин при 30 °С. Затем в эту же пробу вносили субстрат ГР – 1 мМ окисленный глутатион и вновь в тех же условиях регистрировали изменение оптической плотности при 340 нм. Активность СОД определяли с использованием супероксидгенерирующей реакции автоокисления адреналина, регистрируя образование адренохрома при длине волны 347 нм, как описано ранее [4, 5, 21, 22]. Реакцию проводили в 0,2 М карбонатном буфере, рН 10,5 с внесением 0,26 мМ адреналина гидрохлорида при температуре 21 °С. Активность фермента оценивали по способности супернатанта гомогената печени и мозга ингибировать генерацию супероксидных радикалов. В пробу вносили 10 мкл разведенного исследуемого супернатанта: исходный супернатант печени разводили физиологическим раствором в соотношении 1: 100, исходный супернатант мозга – 1:10. Активность фермента ГР и неспецифическое окисление NADPH выражали в микромолях NADPH/(мин ×мг белка), учитывая коэффициент молярной экстинции для NADPH равный 6220 М -1 см -1 . Активность СОД выражали в усл. ед./(мин ×мг белка). За одну условную единицу принимали величину % ингибирования скорости реакции автоокисления адреналина в присутствии супернатанта цитозольной фракции печени или мозга в пересчёте на мг белка. Концентрацию белка в супернатантах определяли по методу Лоури [23]: в супернатанте печени она составляла 55,6±5,4 мг/мл, мозга 10,5±2,8 мг/мл. В работе использовали спектрофотометр Uvikon 923 (Италия) в режиме “time Driver”. Статистическую обработку результатов проводили с использованием t-критерия Стьюдента (программы Microsoft Excel): определяли среднее значение, ошибку средней и достоверность результатов (р) по функции t тест. В работе использовались реактивы: окисленный глутатион, NADPH, НEPES, трис, ЭДТА и Na 2 CO 3 (“Sigma”, США); NaHCO 3 (“J.T.Baker”, Нидерланды); 0,1% раствор адреналина гидрохлорида (фармакопейная форма). Все растворы готовили на бидистиллированной воде. жүктеу/скачать 465,07 Kb. Достарыңызбен бөлісу:
|