Активность цитоплазматической супероксиддисмутазы чувствительный показатель состояния антиоксидантной системы печени и мозга крыс

Препарат “Натуральный экстракт доктора Мухина” представляет собой
35% спиртовой экстракт из личинок большой восковой моли Calleria mellonella
и известен как средство народной медицины для лечения туберкулеза.
Научный интерес к Calleria mellonella и к этому средству возник ещё в начале
XХ века. С этим объектом работал известный ученый С.И. Метальников
[14, 15], ссылаясь в своих исследованиях на работы И.И. Мечникова [14].
Позднее врач-кардиолог и гомеопат С.А. Мухин применил это средство
в своей медицинской практике и выявил его лечебное действие при
сердечно-сосудистых заболеваниях [16]. В нашей лаборатории ведётся
изучение механизма действия этого препарата, запатентован способ его
получения [17, 18], выявлен широкий спектр его влияния, связанный, вероятно,
с выраженными его антиоксидантными и иммунопротекторными свойствами
[13]. Антиоксидантная активность препарата была выявлена в различных
моделях in vitro и in vivo [19, 13]. Разработана технология его производства
(совместно с ОАО “ДИОД”, г. Москва), и в настоящее время препарат
находится на стадии доклинических испытаний. 
Животных содержали в стандартных условиях вивария. Вес животных
составлял 
290–300 
г. 
В 
день 
эксперимента 
контрольных 
и
прекондиционированных крыс подвергали иммобилизационному стрессу.
Стресс вызывали обездвиживанием животного на специальной дощечке
в положении на животе в растяжку, фиксируя за 4 конечности и резцы;
продолжительность иммобилизации – 30 мин и 360 мин (6 ч). Животных
декапитировали сразу после окончания иммобилизации. Проводили
визуальную оценку состояния внутренних органов, взвешивали тимус. 
Для получения гомогенатов тканей извлекали печень и головной мозг,
исключая продолговатый мозг и мозжечок, переносили их в охлаждённый
раствор, содержащий 125 мМ КСl, 10 мМ HEPES-КОН буфер, рН 7,5.
Дважды промывали этим же буфером, взвешивали, продавливали через
пресс и гомогенизировали в буфере в соотношении 1 : 1 (для печени) и 1 : 2,5
(для мозга). Гомогенат фильтровали через 2 слоя капроновой ткани и
центрифугировали на холоду 15 мин при 6000 g, аликвоты полученного
супернатанта хранили при -20
°С. Измерение активности ферментов проводили
не позднее 2-3 суток.
О состоянии антиоксидантной системы в цитоплазматической фракции
печени и мозга крыс судили по изменению активности СОД (КФ 1.15.1.1),
нейтрализующей супероксидные радикалы; ГР (КФ 1.6.4.2), контролирующей
в клетке общий пул важнейшего внутриклеточного антиоксиданта
восстановленного глутатиона и использующей восстановленный NADPH,
поддерживая, таким образом, баланс NADP / NADPH; и введённом нами
ранее [5] показателе неспецифическое окисление NADPH. Параметр
“неспецифическое окисление NADPH” был предложен нами как
самостоятельный показатель оценки редокс-состояния ткани [5].
Он обязательно учитывается при расчете скорости окисления NADPH
ферментом ГР: ставится проба в отсутствии субстрата окисленного глутатиона
и вносится соответствующая поправка на неспецифическое окисление
NADPH согласно методу, описанному для измерения ГР [20]. Активность ГР,
и, соответственно, неспецифическое окисление NADPH определяли
по регистрации убыли NADPH при 340 нм в отсутствии (таким образом
определяется неспецифическое окисление NADPH) и в присутствии
окисленного глутатиона, являющегося субстратом ГР. Фермент ГР переводит
глутатион из окисленного состояния в восстановленное. Измерения проводили

жүктеу/скачать 465,07 Kb.

Достарыңызбен бөлісу: