Методические указания к выполнению лабораторной работы по дисциплинам «Микробиология»


 Методы стерилизации посуды и питательных сред



Pdf көрінісі
бет10/19
Дата06.01.2022
өлшемі469,16 Kb.
#13431
1   ...   6   7   8   9   10   11   12   13   ...   19
Байланысты:
cultivation

4. Методы стерилизации посуды и питательных сред 

Стерилизация – важнейший этап и главное условие получения чи-

стых культур микроорганизмов. Слово «стерилизация» в переводе с ла-

тинского  означает  «обеспложивание».  В  практической  работе  под  сте-

рилизацией  понимают  методы,  применяемые  для  уничтожения  всех 

форм жизни как на поверхности, так и внутри стерилизуемых объектов. 

Стерилизуют  посуду,  инструменты,  питательные  среды  и  другие  необ-

ходимые предметы с целью не допустить развитие посторонних микро-

организмов в исследуемых культурах. Основные способы стерилизации 

питательных  сред,  посуды  и  других  лабораторных  материалов  пред-

ставлены в таблице. 

Таблица 2 



Способы стерилизации питательных сред, посуды и других лабораторных 

материалов 

Стерилизуемый  

материал 

Метод стерилизации 

Режим  

стерилизации 

Примечание 

Натуральные пита-

тельные среды (поч-

венная вытяжка, кар-

тофельные и др.) 

натуральные среды 

Автоклавирование 

1,5–2,0 ати;  

30 мин 

В колбах, про-

бирках, бутылях 

и т. д., закрытых 

пробками 





Окончание табл. 2 

Стерилизуемый  

материал 

Метод стерилизации 

Режим  

стерилизации 

Примечание 

Жидкие и агаризован-

ные среды, не содер-

жащие сахаров и дру-

гих веществ, разлага-

ющих при 120 °С 

То же 1,0 

ати; 20 мин 

То же 

Жидкие и агаризован-



ные среды с сахарами 

и другими соединени-

ями, не выдерживаю-

щими нагревания при 

120 °С 

То же 


0,5 ати; 15–30 

мин 


То же 

Среды или компонен-

ты сред , не выдержи-

вающие нагревание 

(белки, некоторые  

витамины и амино-

кислоты) 

Фильтрование через 

бактериальные  

фильтры 


– – 

Чашки Петри,  

пипетки, шпатели 

То же 160–170 

°С; 2 ч 

Завернуты в 

бумагу (отвер-

стия пипеток 

закрыты ватны-

ми пробками) 

Колбы, пробирки,  

химические стаканы, 

флаконы, стеклянные 

центрифужные про-

бирки 

То же 160–170 



°С; 2 ч 

Закрыты  

ватными проб-

ками 


Шприцы 

Горячий воздух 160 

°С; 1 ч 

Разобраны и 

завернуты в бу-

магу  


Автоклавирование 

1,0 ати;  

15–20 мин 

Разобраны и 

завернуты в бу-

магу 


*ати – атмосферное давление избыточное 

 

Существует термическая и холодная стерилизация. 



 

Термическая  стерилизация  осуществляется  прокаливанием  в 

пламене  и  обжигание,  горячим  воздухом  (сухожаровая  стерилизация), 

насыщенным под давлением паром (автоклавирование), дробная стери-

лизация (тиндализация), кипячением и др. 




10 

1.   Прокаливание  на  огне:  в  пламени  горелки  или  спиртовки 

обычно  стерилизуют  петли  и  иглы  для  посева,  предметные  стекла,  ин-

струмент. 

2.   Кипячение – в течение 30 мин: обычно кипятят шприцы, иглы, 

пищевые продукты и др. При этом могут сохраняться споры бактерий. 

3.   Стерилизация  сухим  жаром  (сухожаровая) – в  специальном 

сушильном шкафу, как правило, стерилизуют хорошо вымытую посуду: 

колбы,  пробирки  и  др.;  обычно  каждый  предмет  завертывают  в  перга-

ментную бумагу. При температуре 160–170 °С погибают не только все 

микроорганизмы, но и их споры. 

4.   Стерилизация паром проводится при температуре 100–120 °С, 

так как во влажной атмосфере микроорганизмы погибают быстрее при 

более низкой температуре. 

Существует два способа стерилизации паром: 

а)   стерилизация насыщенным паром под давлением 

Данный способ стерилизации питательных сред является наиболее 

надежным и чаще всего приемлемым. Он основан на нагревании мате-

риала насыщенным водяным паром при  давлении выше  атмосферного. 

Совместное действие высокой температуры и пара обеспечивает особую 

эффективность этого процесса (табл. 2). 

Таблица 3 



Температура насыщенного пара при разных давлениях 

Давление 

Температура, °С 

100 111 121 128 134 

ати 

0,0 0,5 1,0 1,5 2,0 



атм 

1,0 1,5 2,0 2,5 3,0 

 

Обычно автоклавирование осуществляется при температуре 121 °С 



(1 атм) в течении 15–30 мин, при этом погибают и вегетативные клетки 

споры микроорганизмов). Этот способ не приемлем для тех сред, кото-

рые содержат в своем составе белки или другие вещества, разрушающи-

еся при высокой температуре; 

б)   стерилизация текучим паром (тиндализация) 

Тиндализация, стерилизация текучим паром применяется для сред, 

портящихся  при  действии  температур  выше 100 °С.  Тиндализацию 

осуществляют текучим паром в автоклаве с завинченной крышкой или в 

кипятильнике  Коха.  Среды  нагревают  несколько  раз  по 10–15 мин. 

Между прогреванием среды ставят в  термостат при  температуре 30 °С 

на 8–12 ч для прорастания жизнеспособных спор. Среды,  не выдержи-

вающие нагревание при 100 °С, прогревают более осторожно: при 60–80 

°С через каждые 8–12 ч 4–5 суток подряд. 



11 

5)   Пастеризация – метод, применяемый для уничтожения неспо-

роносных  бактерий  в  питательных  средах  (вине,  молоке,  соке,  пиве  и 

др.), теряющих свои качества при кипячении. Пастеризуют среды в те-

чение 15–30 мин.  при  температуре 50–60 °С  или  в  течение 5–10 мин. 

при температуре 70–80 °С в водяной бане или термостатах. 





Достарыңызбен бөлісу:
1   ...   6   7   8   9   10   11   12   13   ...   19




©emirsaba.org 2024
әкімшілігінің қараңыз

    Басты бет