Методические указания к выполнению лабораторной работы по дисциплинам «Микробиология»


 Методы стерилизации посуды и питательных сред



Pdf көрінісі
бет10/19
Дата06.01.2022
өлшемі469,16 Kb.
#13431
1   ...   6   7   8   9   10   11   12   13   ...   19
Байланысты:
cultivation

4. Методы стерилизации посуды и питательных сред 

Стерилизация – важнейший этап и главное условие получения чи-

стых культур микроорганизмов. Слово «стерилизация» в переводе с ла-

тинского  означает  «обеспложивание».  В  практической  работе  под  сте-

рилизацией  понимают  методы,  применяемые  для  уничтожения  всех 

форм жизни как на поверхности, так и внутри стерилизуемых объектов. 

Стерилизуют  посуду,  инструменты,  питательные  среды  и  другие  необ-

ходимые предметы с целью не допустить развитие посторонних микро-

организмов в исследуемых культурах. Основные способы стерилизации 

питательных  сред,  посуды  и  других  лабораторных  материалов  пред-

ставлены в таблице. 

Таблица 2 



Способы стерилизации питательных сред, посуды и других лабораторных 

материалов 

Стерилизуемый  

материал 

Метод стерилизации 

Режим  

стерилизации 

Примечание 

Натуральные пита-

тельные среды (поч-

венная вытяжка, кар-

тофельные и др.) 

натуральные среды 

Автоклавирование 

1,5–2,0 ати;  

30 мин 

В колбах, про-

бирках, бутылях 

и т. д., закрытых 

пробками 





Окончание табл. 2 

Стерилизуемый  

материал 

Метод стерилизации 

Режим  

стерилизации 

Примечание 

Жидкие и агаризован-

ные среды, не содер-

жащие сахаров и дру-

гих веществ, разлага-

ющих при 120 °С 

То же 1,0 

ати; 20 мин 

То же 

Жидкие и агаризован-



ные среды с сахарами 

и другими соединени-

ями, не выдерживаю-

щими нагревания при 

120 °С 

То же 


0,5 ати; 15–30 

мин 


То же 

Среды или компонен-

ты сред , не выдержи-

вающие нагревание 

(белки, некоторые  

витамины и амино-

кислоты) 

Фильтрование через 

бактериальные  

фильтры 


– – 

Чашки Петри,  

пипетки, шпатели 

То же 160–170 

°С; 2 ч 

Завернуты в 

бумагу (отвер-

стия пипеток 

закрыты ватны-

ми пробками) 

Колбы, пробирки,  

химические стаканы, 

флаконы, стеклянные 

центрифужные про-

бирки 

То же 160–170 



°С; 2 ч 

Закрыты  

ватными проб-

ками 


Шприцы 

Горячий воздух 160 

°С; 1 ч 

Разобраны и 

завернуты в бу-

магу  


Автоклавирование 

1,0 ати;  

15–20 мин 

Разобраны и 

завернуты в бу-

магу 


*ати – атмосферное давление избыточное 

 

Существует термическая и холодная стерилизация. 



 

Термическая  стерилизация  осуществляется  прокаливанием  в 

пламене  и  обжигание,  горячим  воздухом  (сухожаровая  стерилизация), 

насыщенным под давлением паром (автоклавирование), дробная стери-

лизация (тиндализация), кипячением и др. 




10 

1.   Прокаливание  на  огне:  в  пламени  горелки  или  спиртовки 

обычно  стерилизуют  петли  и  иглы  для  посева,  предметные  стекла,  ин-

струмент. 

2.   Кипячение – в течение 30 мин: обычно кипятят шприцы, иглы, 

пищевые продукты и др. При этом могут сохраняться споры бактерий. 

3.   Стерилизация  сухим  жаром  (сухожаровая) – в  специальном 

сушильном шкафу, как правило, стерилизуют хорошо вымытую посуду: 

колбы,  пробирки  и  др.;  обычно  каждый  предмет  завертывают  в  перга-

ментную бумагу. При температуре 160–170 °С погибают не только все 

микроорганизмы, но и их споры. 

4.   Стерилизация паром проводится при температуре 100–120 °С, 

так как во влажной атмосфере микроорганизмы погибают быстрее при 

более низкой температуре. 

Существует два способа стерилизации паром

а)   стерилизация насыщенным паром под давлением 

Данный способ стерилизации питательных сред является наиболее 

надежным и чаще всего приемлемым. Он основан на нагревании мате-

риала насыщенным водяным паром при  давлении выше  атмосферного. 

Совместное действие высокой температуры и пара обеспечивает особую 

эффективность этого процесса (табл. 2). 

Таблица 3 



Температура насыщенного пара при разных давлениях 

Давление 

Температура, °С 

100 111 121 128 134 

ати 

0,0 0,5 1,0 1,5 2,0 



атм 

1,0 1,5 2,0 2,5 3,0 

 

Обычно автоклавирование осуществляется при температуре 121 °С 



(1 атм) в течении 15–30 мин, при этом погибают и вегетативные клетки 

споры микроорганизмов). Этот способ не приемлем для тех сред, кото-

рые содержат в своем составе белки или другие вещества, разрушающи-

еся при высокой температуре; 

б)   стерилизация текучим паром (тиндализация) 

Тиндализация, стерилизация текучим паром применяется для сред, 

портящихся  при  действии  температур  выше 100 °С.  Тиндализацию 

осуществляют текучим паром в автоклаве с завинченной крышкой или в 

кипятильнике  Коха.  Среды  нагревают  несколько  раз  по 10–15 мин. 

Между прогреванием среды ставят в  термостат при  температуре 30 °С 

на 8–12 ч для прорастания жизнеспособных спор. Среды,  не выдержи-

вающие нагревание при 100 °С, прогревают более осторожно: при 60–80 

°С через каждые 8–12 ч 4–5 суток подряд. 



11 

5)   Пастеризация – метод, применяемый для уничтожения неспо-

роносных  бактерий  в  питательных  средах  (вине,  молоке,  соке,  пиве  и 

др.), теряющих свои качества при кипячении. Пастеризуют среды в те-

чение 15–30 мин.  при  температуре 50–60 °С  или  в  течение 5–10 мин. 

при температуре 70–80 °С в водяной бане или термостатах. 





Достарыңызбен бөлісу:
1   ...   6   7   8   9   10   11   12   13   ...   19




©emirsaba.org 2024
әкімшілігінің қараңыз

    Басты бет