Первый день исследования
Биологическая проба. Немного (3-5 мл мокроты) эмульгируют в
стерильном бульоне, 0,5 мл этой смеси вводят внутрибрюшинно белой мыши.
Через 6-8 ч у мыши отмечаются признаки заболевания. В
это время
пневмококк уже можно обнаружить в экссудате брюшной полости. Экссудат
берут стерильным шприцем. Из него делают мазки, окрашивают по Граму и
микроскопируют. Для выделения чистой культуры экссудат засевают на агар
с сывороткой. Если мышь погибает или заболевает, делают посев крови из
сердца на агар с сывороткой крови для выделения чистой культуры. Посевы
ставят в термостат.
Ускоренный метод определения типа пневмококка (реакция
микроагглютинации). 4 капли экссудата из брюшной полости зараженной
мыши наносят на предметное стекло. К первой капле прибавляют
агглютинирующую сыворотку I типа, ко второй - сыворотку II типа, к третьей
-
III типа, к четвертой - изотонический раствор натрия хлорида (контроль).
Сыворотки I и II типа предварительно разводят в
соотношении 1:10, а
сыворотку III типа - 1:5. Все капли размешивают, высушивают, фиксируют и
окрашивают разведенным фуксином. При положительном результате в одной
из капель отмечается скучивание микробов (агглютинация).
Второй день исследования
Посевы вынимают из термостата, просматривают и из
подозрительных
колоний делают мазки. При наличии в мазках грамположительных
ланцетовидных диплококков 2-3 колонии выделяют на скошенный агар с
сывороткой для получения чистой культуры. Посевы помещают в термостат.
Из бульона делают мазки, окрашивают по Граму и микроскопируют.
Третий день исследования
Посевы вынимают из термостата. Проверяют чистоту культуры - делают
мазки, окрашивают по Граму и микроскопируют. При наличии в выделенной
культуре грамположительных ланцетовидных диплококков проводят
идентификацию выделенной культуры путем посева:
1) на среды Гисса (лактоза, глюкоза, сахароза, мальтоза) проводят посев
обычным
способом - уколом в среду;
2) на среду с инулином;
3) на среду с оптохином;
4) ставят пробу с желчью.
Проба на инулин. Исследуемую культуру засевают на питательную среду,
содержащую инулин и лакмусовую настойку, и ставят в термостат. Через 18-
24 ч посевы вынимают из термостата. При наличии пневмококков среда
окрашивается в красный цвет (стрептококки консистенцию и цвет среды не
меняют).
Достарыңызбен бөлісу: