Среды с сывороткой крови готовят так же, как среды с кровью. К
основным средам добавляют 10-20% сыворотки, не содержащей консерванта
и предварительно инактивированной при 56° С в течение 30 мин на водяной
бане или в инактиваторе. При инактивации разрушается вещество
(комплемент), губительно действующее на микробы.
Среды с желчью. К простым средам добавляют желчь в количестве 10-40%
объема среды, устанавливают нужный рН и стерилизуют 20 мин при 120° С.
Можно стерильную желчь добавить к стерильной среде в асептических
условиях.
Разлив агаровых сред в чашки Петри. Среды перед разливом
расплавляют на водяной бане и остужают до 45-50° С. Обычно для чашки
диаметром 9 см достаточно 15-20 мл среды (высота слоя 0,25-0,3 см). Если
слой выше, на нем менее контрастно выглядят колонии. При очень тонком слое
резко ограничено количество питательных веществ и влаги (среда быстро
высыхает) - ухудшаются условия культивирования.
Разливают среды в стерильные чашки в асептических условиях. Чашки
ставят крышкой вверх. Сосуд со средой берут в правую руку, держа его у огня.
Левой рукой вынимают пробку, зажав ее мизинцем и ладонью. Обжигают
горлышко сосуда и двумя пальцами левой руки слегка приоткрывают крышку.
Вводят под нее горлышко флакона, не прикасаясь им к краю чашки. Наливая
среду, следят чтобы она равномерно распределилась по дну чашки. Если при
разливе на поверхности среды образуются пузырьки воздуха, к ним до того,
как среда застынет, подносят пламя спички или горелки - пузырьки лопнут.
Затем чашку закрывают и дают среде застыть. Если посев производят в день
разлива, среду необходимо подсушить. Для этого чашки в термостате
осторожно открывают и устанавливают крышки и чашки открытой стороной
вниз на 20-30 мин. Если посев производят на следующий день после разлива,
чашки, не подсушивая, завертывают в ту же бумагу, в которой их
стерилизовали, и помещают в холодильник.
