С курсом факультета повышения квалификации и переподготовки кадров



Pdf көрінісі
бет174/375
Дата31.12.2021
өлшемі2,61 Mb.
#21760
1   ...   170   171   172   173   174   175   176   177   ...   375
Байланысты:
Farmatsevticheskaia biotekhnologiia Moiseev-DV 2020


разделяют  биомассу  и  культуральную  жидкость,  в  которой  содержатся 
моноклональные антитела, очищают жидкую часть. 
Получение  гибридом  из  асцитической  жидкости  (культивирование 
гибридом in vivo) 


Часть 2. Частные вопросы биотехнологии. Клеточная биотехнология 
 
 
140
 
 
За  3–10  дней  до  инокуляции  гибридом  мышам  внутрибрюшинно 
вводят  0,5  мл  вазелинового  масла  для  индукции  роста  гибридом  в 
асцитной  среде.  10
7
  клеток  гибридом  ICO-90  внутрибрюшинно  вводят. 
Через 7–8 дней собирают асцитную жидкость. Центрифугируют ее при 4ºС 
в  течение  20  мин  при  2500g.  В  надосадочной  жидкости  содержатся 
моноклональные  антитела  в  наибольшей  концентрации.  Эту  жидкость 
хранят при – 50ºС. 
8. Выделение и очистка моноклональных антител 
Выделяют  путем  аффинной  хроматографии  на  А-сефарозе. 
Асцитную  или  культуральную  жидкость  диализуют  против  фосфатного 
буфера с рН 8,0 при 4ºС в течение 12–16 ч. Диализат наносят на колонку, 
уравновешенную  этим  же  буфером  и  промывают  до  отсутствия  белка. 
Моноклональные  антитела,  связавшиеся  с  сорбентом,  элюируют 
цитратным  буфером  с  рН  3,0.  Полученный  элюат  концентрируют 
ультрафильтрацией. 
Количественное  определение  моноклональных  антител  проводят 
подходящим  иммунохимическим  методом.  Контролируются  также 
остаточные и посторонние белки методом ВЭЖХ. 
 
 


Достарыңызбен бөлісу:
1   ...   170   171   172   173   174   175   176   177   ...   375




©emirsaba.org 2024
әкімшілігінің қараңыз

    Басты бет