"фараби əлемі" атты халықаралық ғылыми конференция материалдары
УСИЛЕНИЕ ТРАНСЛЯЦИИ БЕЛКА В КЛЕТКАХ E. COLI ПРИ РАЗЛИЧНЫХ
жүктеу/скачать 2,79 Mb. Pdf көрінісі
|
| УСИЛЕНИЕ ТРАНСЛЯЦИИ БЕЛКА В КЛЕТКАХ E. COLI ПРИ РАЗЛИЧНЫХ
ТЕМПЕРАТУРНЫХ РЕЖИМАХ КУЛЬТИВИРОВАНИЯ Мусабаев Р.У. 1,2 , Байбагысов А.М. 1 , Семенова Н.Ю. 1 , Сапаралы Ж. 1 , Ковалева К.Д. 1 Казахский Национальный Университет им. аль-Фараби Институт молекулярной биологии и биохимии им. М.А Айтхожина mussabayevruslan7@gmail.com Инициация трансляции у прокариотических организмов происходит благодаря комплиментарному взаимодействию последовательности Шайн-Далгарно – региона в 5’- нетранслируемой последовательности (5’-НТП) мРНК, и 3'-концевой последовательности 16S рРНК. Однако этот механизм не является универсальным, поскольку многие прокариотические мРНК лишены последовательности Шайн-Далгарно, что не мешает их экспрессии. При анализе последовательностей прокариотических мРНК с высоким уровнем экспрессии было выявлено наличие в их 5’-НТП последовательности 5’-UGAUCC-3’, располагавшейся в районе от -84 н. до - 12 н. перед стартовым кодоном. Эта последовательность комплиментарна сайту 5’-GGAUCA-3’ на 3'- конце 16S рРНК, предшествующему последовательности анти-Шайн-Далгарно. Было высказано предположение, что данная последовательность, названная TPS (Translation-initiation Promoting Site), является сайтом связывания рибосом, аналогичным Шайн-Далгарно. Нами были получены конструкции на основе плазмиды pET23c, кодирующие ген ß- глюкуронидазы (GUS) под управлением Т7-промотора и Т7-терминатора транскрипции и отличающиеся своими 5’-НТП: emp (без энхансера), SD (классическая Шайн-Далгарно), TPS, TPS_SD (между сайтами расположен спейсерный участок длиной 6 н.), TPSlongSD (между сайтами расположен участок длиной 30 н.), 5'A (5’-НТП гена EcspA, кодирующего белок холодового шока E. coli). 5’-НТП гена EcspA является прокариотическим энхансером, усиливающим биосинтез белка при понижении температуры . Полученными конструкциями трансформировали клетки E. coli экспрессионного штамма BL-21(DE3) и проводили экспрессию белка GUS при разных температурных режимах (25ºС, 37ºС, 44ºС). Из клеток выделяли тотальный растворимый белок и измеряли в полученных экстрактах активность GUS. Энхансерной активности у конструкции TPS не наблюдалось (отсутствовало достоверное отличия от emp), а для конструкций SD, TPS_SD, TPSlongSD, 5'A наблюдалось достоверное превышение значений GUS-активности по сравнению с emp. Для TPSlongSD и 5'A при температуре экспрессии 25ºС регистрировалось достоверное превышение значений GUS-активности по сравнению с SD (в 4,2 и 4,1 раза соответственно). Также для TPSlongSD с температурой экспрессии 44ºС 160 регистрировалось достоверное превышение значений GUS-активности по сравнению с SD в 1,8 раза. Таким образом, помещение последовательности TPS в нескольких нуклеотидах перед классическим сайтом связывания рибосом Шайн-Далгарно в мРНК достоверно усиливает экспрессию белка в клетках E. coli в стрессовых температурных условиях. Научный руководитель: д.б.н., профессор Искаков Б.К. жүктеу/скачать 2,79 Mb. Достарыңызбен бөлісу:
|