146
ластырады. 1-5 бірлік рестриктазаларды қосады. Жақсылап араласты-
рады. Қоспаны 37ºС-де 1 сағат инкубациялайды. Реакцияны 4 мкл 0,5
М ЭДТА енгізу арқасында тоқтатады. Үлгіні енгізу үшін 3мкл буферді
қосады. Үлгіні 0,8%-дық агароз геліне енгізеді де, ДНҚ фрагменттерінің
электрофорезін жүргізеді. Сонымен қатар электрофорезге белгілі
мөлшердегі фрагменттер мен ДНҚ маркерлерін енгізеді. Алынған
ДНҚ бөлiктерінің мөлшерін талдайды, рестрикция сайттарының са-
нын жəне олардың молекулалық ДНҚ қарым-қатынасында орналасуын
анықтайды.
Алынған рестрикциялық картасы ДНҚ рестрикция молекуласында
əртүрлі рестриктазаларға арналған сайттардың орналасуын көрсетеді.
Сонымен, фага λ негізінде векторларға құрастырылған 20 мың н.ж.
ДНҚ-фрагменттері енеді, яғни плазмид вектормен салыстырғанда
екі есе көбірек. Сондықтан фаг λ векторлары организмдердің үлкен
өлшемі бар геномдарды клондау үшін ыңғайлы болады.
Фагтардың бөлшектеріне хромосомдық ДНҚ-ны орау механизмінің
тек ДНҚ-ның бір өлшемі бар фрагменттерді енгізу мүмкіндігі бар.
Егер осы арақатынас сəйкес болмаса, векторлық молекулалар фагтарға
оралмайды жəне олар клондан,айды.
Достарыңызбен бөлісу: