Литература для студентов Учебная литература для студентов медицинских вузов и медицинских



Pdf көрінісі
бет9/620
Дата15.12.2023
өлшемі31,79 Mb.
#138676
түріЛитература
1   ...   5   6   7   8   9   10   11   12   ...   620
Байланысты:
Гистология Афанасьев 2004

Электронная микроскопия
. Большим шагом вперед в развитии техники 
микроскопии были создание и применение электронного микроскопа (см. 
рис. 1, Б). В электронном микроскопе используется поток электронов с бо­
лее короткими, чем в световом микроскопе, длинами волн. При напряже­
нии 50 ООО В длина волны электромагнитных колебаний, возникающих при 
движении потока электронов в вакууме, равна 0,0056 нм. Теоретически рас­
считано, что разрешаемое расстояние в этих условиях может быть около
0,002 нм, или 0,000002 мкм, т. е. в 100 000 раз меньше, чем в световом мик­
роскопе. Практически в современных электронных микроскопах разрешае­
мое расстояние составляет около 0,1—0,7 нм.
В настоящее время широко используются трансмиссионные (просвечи­
вающие) электронные микроскопы (ТЭМ) (см. рис.1,Б) и сканирующие (рас­
тровые) электронные микроскопы (СЭМ). С помощью ТЭМ можно получить 
лишь плоскостное изображение изучаемого микрообъекта. Для получения 
пространственного представления о структурах применяют СЭМ, способные 
создавать трехмерное изображение. Растровый электронный микроскоп рабо­
тает по принципу сканирования электронным микрозондом исследуемого 
объекта, т. е. последовательно "ощупывает" остро сфокусированным элек­
тронным пучком отдельные точки поверхности. Для исследования выбранно­
го участка микрозонд двигается по его поверхности под действием отклоняю­
щих катушек (принцип телевизионной развертки). Такое исследование объек­
та называется сканированием (считыванием), а рисунок, по которому движет­
ся микрозонд, — растром. Полученное изображение выводится на телевизи­
онный экран, электронный луч которого движется синхронно с микрозондом.
Главными достоинствами растровой электронной микроскопии являются 
большая глубина резкости, широкий диапазон непрерывного изменения 
увеличения (от десятков до десятков тысяч раз) и высокая разрешающая 
способность.
Электронная микроскопия по методу замораживания
— 
скалывания
применяется 
для изучения деталей строения мембран и межклеточных соединений. Для изготов­
ления сколов клетки замораживают при низкой температуре (-160 °С). При ис­
следовании мембраны плоскость скола проходит через середину бислоя липидов. 
Далее на внутренние поверхности полученных половинок мембран напыляют метал­
лы (платина, палладий, уран), изучают их с помощью ТЭМ и микрофотографии.
Метод криоэлектронной микроскопии.
Быстро замороженный тонкий слой (около 
100 нм) образца ткани помещают на микроскопическую решетку и исследуют в ва­
кууме микроскопа при —160 °С.
Метод электронной микроскопии "замораживание
— 
травление
" применяют для 
изучения внешней поверхности мембран клеток. После быстрого замораживания 
клеток при очень низкой температуре блок раскалывают лезвием ножа. Образую­
щиеся кристаллы льда удаляют путем возгонки воды в вакууме. Затем участки кле­
ток оттеняют, напыляя тонкую пленку тяжелого металла (например, платины). Ме­
тод позволяет выявлять трехмерную организацию структур.
Таким образом, методы замораживания — скалывания и замораживания — 
травления позволяют изучать нефиксированные клетки без образования в 
них артефактов, вызываемых фиксацией.
15


Методы контрастирования солями тяжелых металлов
позволяют исследо­
вать в электронном микроскопе отдельные макромолекулы — ДНК, круп­
ных белков (например, миозин). При негативном контрастировании изуча­
ют агрегаты макромолекул (рибосомы, вирусы) либо белковые филаменты 
(актиновые нити).
Электронная микроскопия ультратонких срезов, полученных методом крио-
улътрамикротомии.
При этом методе кусочки тканей без фиксации и залив­
ки в твердые среды быстро охлаждают в жидком азоте при температуре 
—196 °С. Это обеспечивает торможение метаболических процессов клеток и 
переход воды из жидкой фазы в твердую. Далее блоки режут на ультрамик­
ротоме при низкой температуре. Такой метод приготовления срезов обычно 
используют для определения активности ферментов, а также для проведе­
ния иммунохимических реакций. Для выявления антигенов применяют ан­
титела, связанные с частицами коллоидного золота, локализацию которого 
легко выявить на препаратах.
Методы сверхвысоковольтной микроскопии.
Используют электронные 
микроскопы с ускоряющим напряжением до 3 ООО ООО В. Преимущество 
этих микроскопов в том, что они позволяют исследовать объекты большой 
толщины (1—10 мкм), так как при высокой энергии электронов они мень­
ше поглощаются объектом. Стереоскопическая съемка позволяет получать 
информацию о трехмерной организации внутриклеточных структур с высо­
ким разрешением (около 0,5 нм).
Рентгеноструктурный анализ.
Для изучения структуры макромолекул на 
атомарном уровне применяют методы с использованием рентгеновских лу­
чей, имеющих длину волны около 0,1 нм (диаметр атома водорода). Моле­
кулы, образующие кристаллическую решетку, изучают с помощью дифрак­
ционных картин, которые регистрируют на фотопластинке в виде множест­
ва пятен различной интенсивности. Интенсивность пятен зависит от спо­
собности различных объектов в решетке рассеивать излучение. Положение 
пятен в дифракционной картине зависит от положения объекта в системе, а 
их интенсивность свидетельствует о его внутренней атомной структуре.


Достарыңызбен бөлісу:
1   ...   5   6   7   8   9   10   11   12   ...   620




©emirsaba.org 2024
әкімшілігінің қараңыз

    Басты бет