Моноклональды антиденелер
жүктеу/скачать 0,99 Mb. Pdf көрінісі
|
- Бұл бет үшін навигация:
- Моноклоналды антиденелер өндірісі
- Моноклоналды антиденелер өндірісі 4. Гибридоманың оң клондарын скрининг және клондау
| 2. Жасушалық синтез
Тышқандарды көмірқышқыл газымен өлтіреді, ал көкбауырды асептикалық жолмен шығарады. Содан кейін көкбауырдың суспензиясын жасау үшін оны сығып, петри табағына салыңыз. Дайын сингеникалық миелома жасушалары мен тышқан көкбауыр жасушалары белгілі бір пропорцияда араласады, және синтездеу промоторы полиэтиленгликольді қосады. Полиэтиленгликоль рөлінде әр түрлі лимфоциттер миелома жасушаларымен қосылып гибридомалық жасушалар түзе алады. Моноклоналды антиденелер өндірісі казахстанско-российский медицинский университет Моноклоналды антиденелер өндірісі 3.Селективті өсіру Селективті культураның мақсаты - біріктірілген гибридомалық жасушаларды скринингтен өткізу және HAT селективті ортасы әдетте қолданылады. HAT ортасында қосылмаған миелома жасушалары гипоксантин-гуанин- фосфорибосилтрансферазаның жетіспеушілігінен және ДНҚ синтезінің құтқару жолының болмауынан өледі. Қосылмаған лимфоциттерде гипоксантин-гуанин-фосфорибосилтрансфераза болса да, олар in vitro жағдайында ұзақ өмір сүре алмайды. HAT ортасында тек біріккен гибридомалық жасушалар өмір сүре алады және көбейе алады, өйткені олар көкбауыр жасушаларынан гипоксантин-гуанин- фосфорибосилтрансферазаны және миелома жасушаларының үздіксіз көбею қабілетін алды. казахстанско-российский медицинский университет Моноклоналды антиденелер өндірісі 4. Гибридоманың оң клондарын скрининг және клондау HAT ортасында өсірілген гибридома жасушаларының кейбіреулері алдын ала анықталған арнайы моноклоналды антиденелерді бөлетін жасушалар болып табылады. Сондықтан скрининг пен клондау қажет. Шектеу сұйылту әдісі әдетте гибридома жасушаларының клональды культурасы үшін қолданылады. Сезімтал, жылдам және арнайы иммунологиялық әдістерді қолдана отырып, қажетті моноклоналды антиденелерді шығара алатын позитивті гибридомалық жасушалар скринингтен өтіп, клондалады және кеңейтіледі. Жан -жақты анықталғаннан кейін иммуноглобулин түрі, танылған антигеннің қосалқы класы, спецификасы, аффинитеті, эпитопы және оның шығаратын моноклоналды антидененің молекулалық массасы, оны уақытында қатыру керек. |