Культивирование вирусов в культуре клеток

Для культивирования вирусов используют перевиваемые клетки, которые 
чаще получают из клеток злокачественных опухолей. 
Однослойные культуры получают из эмбрионов человека, курицы, 
животных. 
Преимущество однослойных культур клеток - простота методики и легкость 
учета. 
Способность клеток к размножению вне организма связана со степенью 
дифференциации ткани. Менее дифференцированные ткани обладают 
большей способностью к пролиферации (соединительная, эпителиальная 
ткань). 
Сущность методов при приготовлении первичных культур ткани 
заключается в разрушении межклеточной ткани и разобщении клеток для 
последующего получения монослоя. 
Разобщение клеток проводится путем воздействия на ткань 
протеолитических ферментов, чаще всего трипсина. Раствор трипсина 
способствует разъединению клеток при сохранении у них способности к 
размножению. Для выращивания культуры клеток необходима питательная 
среда. Состав среды сложный, он включает целый ряд ингредиентов: 
аминокислоты, глюкозу, витамины, минеральные соли, коферменты и т. д. 
Получение культуры ткани проводят в строго асептических условиях. В среду 
добавляются антибиотики (500 ЕД пенициллина и 250 ЕД стрептомицина в 1 
мл) для подавления роста бактериальной флоры. 
Подготовленную ткань заливают 0,25% раствором подогретого трипсина и 
инкубируют в термостате при 37° С. Во время инкубации ткань периодически 
помешивают путем вращения колбы. Трипсинизированные клетки 
центрифугируют при 800-1000 об/мин в течение 5 мин. 
Трипсинизацию и центрифугирование проводят очень осторожно, чтобы не 
травмировать клетки. После центрифугирования надосадочную жидкость 
удаляют, а осадок клеток помещают в небольшой объем питательной среды. 
Для получения однородной массы взвесь клеток фильтруют через один слой 
марли в воронке (стерильной). Взвесь клеток проверяют на стерильность 
путем посева по 0,1 мл , в 2 пробирки с сахарным бульоном. 
Успех культивирования клеток зависит от посевной Дозы, поэтому после 
трипсинизации производят подсчет клеток в камере Горяева. После подсчета 
взвесь клеток разводят питательной средой из такого расчета, чтобы в 1 мл 
содержалось 500000-1000000 клеток и разливают по пробиркам и матрацам. 
Пробирки с культурой ткани инкубируют в термостате в наклонном 
положении. 

Посеянные культуры ежедневно просматривают под малым увеличением 
микроскопа для определения характера их роста. Нормальные 
пролиферирующие клетки светлые и растут однослойным пластом. Если 
клетки темные, зернистые и не пролиферируют, что может быть результатом 
загрязнения (плохая обработка посуды или загрязнение ингредиентов), то 
такие культуры изымают из опыта. 
Смена питательной среды через 2-3 дня после посева улучшает 
интенсивность пролиферации. 
Нормальные, хорошо пролиферирующие клетки заражают исследуемым 
материалом. 
Перевиваемые культуры преимущественно получают из злокачественных 
опухолей. Штамм Hela - культура клеток рака шейки матки женщины по имени 
Helena (получен в 1950 г.); штамм Нер-2 выделен от больного раком гортани. 
Рост этих клеток поддерживается в лабораториях путем последовательных 
пассажей. Особенность их заключается в том, что они размножаются в течение 
длительного срока. В настоящее время эти клетки прошли уже тысячи 
генераций. В процессе пассажей они теряют некоторые морфологические и 
биохимические свойства - подвергаются мутации. Однако остаются вполне 
пригодными для культивирования в них вирусов. Культурой этих клеток 
пользуются лаборатории всего мира. 
Размножение вируса в культуре клеток происходит в различные сроки в 
зависимости от свойств вируса и вида клеток. 
О наличии вируса судят по цитопатическому действию. В микроскопе 
наблюдается дегенерация клеток. Время цитопатического действия и его 
характер зависят от дозы и свойств вируса. 
У некоторых вирусов цитопатическое действие обнаруживается через 
несколько дней (вирус оспы), у других - через 1-2 нед (вирус гепатита и др.). 
В настоящее время известны уже сотни вирусов, поражающих человека. 
Борьба с вирусными инфекциями осуществляется разными методами. 
Наиболее эффективна иммунизация. Таким способом ликвидирована оспа, 
сокращена заболеваемость полиомиелитом. Важное значение в борьбе с 
вирусными инфекциями имеют общественная профилактика - уничтожение 
бродячих собак (борьба с бешенством), личная профилактика и т. д. 
Однако эти меры не могут обеспечить ликвидацию всех вирусных 
заболеваний. Ученые настойчиво ищут пути, при помощи которых можно 
было бы поразить вирус, не повредив клетку, в которой он находится. 

Поэтому закономерно, что в программе КПСС вирусология названа одной 
из ведущих отраслей естественнонаучных знаний, которая должна получить 
преимущественное развитие в ближайшие годы. 

жүктеу/скачать 14,39 Mb.

Достарыңызбен бөлісу: