О книге Special for Dabl-v aka Эукариот Фрида Карловна Черкес, Лина Борисовна Богоявленская, Наталья Александровна Бельская – Микробиология


Окраска по Граму (универсальный метод)



Pdf көрінісі
бет21/305
Дата20.12.2022
өлшемі14,39 Mb.
#58441
түріУчебник
1   ...   17   18   19   20   21   22   23   24   ...   305
Байланысты:
8dccb36

Окраска по Граму (универсальный метод). Наиболее распространенным 
методом дифференциальной окраски является окраска по Граму. 
В зависимости от результатов окраски все микроорганизмы делят на две 
группы - грамположительные и грамотрицательные. 
Грамположительные бактерии содержат в клеточной стенке магниевую соль 
РНК, которая образует комплексное соединение с йодом и основным 
красителем (генциановым, метиловым или кристаллическим фиолетовым). 
Этот комплекс не разрушается при действии спирта, и бактерии сохраняют 
фиолетовый цвет. 
Грамотрицательные бактерии не способны удержать основной краситель
так как не содержат магниевой соли РНК. Под действием спирта краситель 
вымывается, клетки обесцвечиваются и окрашиваются дополнительным 
красителем (фуксином) в красный цвет. 
1. На препарат накладывают бумажку по Синеву и наносят несколько капель 
воды или раствор генцианового фиолетового. Окрашивают 1-2 мин. Снимают 
бумагу или сливают краситель. 


2. Не промывая водой, наносят раствор Люголя до почернения (1 мин), затем 
краситель сливают. 
3. Не промывая водой, наносят 96% спирт до отхождения красителя (30-60 
с). Можно опустить препарат в стаканчик со спиртом на 1-2 с. 
4. Промывают препарат водой. 
5. Докрашивают фуксином Пфейффера 3 мин, промывают водой и 
высушивают. 
Микроскопируют с помощью иммерсионной системы. 
Окраска по Цилю - Нильсену (для кислотоустойчивых бактерий). Этот 
метод применяют для выявления бактерий туберкулеза и проказы, имеющих в 
оболочке клеток большое количество липидов, воска и оксикислот. Бактерии 
кислото-, щелоче- и спиртоустойчивы. Для увеличения проницаемости 
клеточной стенки первый этап окрашивания проводят при подогревании. 
1. Фиксированный препарат покрывают фильтровальной бумагой и наносят 
фуксин Циля. Удерживая стекло пинцетом, препарат подогревают над 
пламенем горелки до отхождения паров. Добавляют новую порцию красителя 
и подогревают еще 2 раза. После охлаждения снимают бумагу и промывают 
препарат водой. 
2. Препарат обесцвечивают 5% раствором серной кислоты, погружая 2-3 
раза в раствор или наливая кислоту на стекло, затем несколько раз промывают 
водой. 
3. Окрашивают водно-спиртовым раствором метиленового синего в течение 
3-
5 мин, промывают водой и высушивают. 
Микроскопируют с помощью иммерсионной системы. 
Кислотоустойчивые бактерии окрашиваются в красный цвет, остальные - в 
синий (см. рис. 4). 


Достарыңызбен бөлісу:
1   ...   17   18   19   20   21   22   23   24   ...   305




©emirsaba.org 2024
әкімшілігінің қараңыз

    Басты бет