Вестник цниит, 2019, №1, с. 100-108

Вестник ЦНИИТ, 2019, № 1, с. 100–108
100
DOI: 10.7868/S2587667819010114
Ключевые слова: микобактерии, метод Циля-Нильсена.
Изложен метод выявления микобактерий (МБ) с помощью микроскопического исследования препаратов, окрашен-
ных по методу Циля-Нильсена. Описаны варианты приготовления препаратов для микроскопии из необработанной 
мокроты, осадка диагностического материала, а также из культуры МБ. Представлена методика окрашивания препа-
ратов по Цилю-Нильсену. Проведен анализ возможных ошибок при приготовлении и окраске мазков.
Поступила: 14.12.2018
ФГБНУ «Центральный научно-исследовательский институт туберкулtза», г. Москва, Россия
© 2019 г. Севастьянова Э.В., Ларионова Е.Е., Андриевская И.Ю.
ВЫЯВЛЕНИЕ МИКОБАКТЕРИЙ МЕТОДОМ 
МИКРОСКОПИИ ПРЕПАРАТОВ, ОКРАШЕННЫХ 
ПО ЦИЛЮ-НИЛЬСЕНУ
Часть 1.
Приготовление и окрашивание препаратов 
для микроскопии
Keywords: mycobacteria, Ziehl-Neelsen microscopy.
We have described the microscopic detection of mycobacteria using Ziehl–Neelsen staining of smears. We described 
variants of smear preparation from untreated sputum, specimen sediments, and mycobacterial culture. We also represented 
the method of Ziehl-Neelsen smear staining, and analyzed possible errors, which occurred during preparation and staining 
of smears.
Submitted as of 14.12.2018
Central TB Research Institute, Moscow, Russia
Sevastyanova E.V., Larionova E.E., Andrievskaya I.Yu.
MICROSCOPIC DETECTION OF MYCOBACTERIA 
BY ZIEHL-NEELSEN STAINING TECHNIQUE
Part 1. Smear preparation and staining procedure
Методики лабораторных исследований
Laboratory Techniques
ВВЕДЕНИЕ
Микроскопия – один из старейших методов, 
применяемых в микробиологических исследова-
ниях, однако, несмотря на развитие и использо-
вание современных диагностических методик, 
он до сих пор не утратил своей актуальности 
и включен в схемы обследования на туберку-
лез (ТБ) [3].
Окраска микроскопических препаратов по 
методу Циля-Нильсена, также известная как 
окраска на наличие кислотоустойчивых бакте-
рий, была впервые описана двумя немецкими 
врачами: бактериологом Францем Цилем и па-
тологоанатомом Фридрихом Нильсеном [6].
Эта окраска используется для того, чтобы 
быстро выявить кислотоустойчивые микроорга-
низмы (КУМ), главным образом – МБ. В первую 

Выявление микобактерий методом микроскопии препаратов, окрашенных по Цилю-Нильсену 
Вестник ЦНИИТ № 1 2019 
101
профилю «фтизиатрия», для первичной иденти-
фикации культур микроорганизмов, выросших 
на плотных и жидких питательных средах, а, при 
необходимости, может быть использован и для 
выявления наличия КУМ в диагностическом ма-
териале. Метод Циля-Нильсена также применя-
ется в патологоанатомической практике и в на-
учно-исследовательских работах.
В настоящее время метод Циля-Нильсена 
унифицирован и используется в соответствии 
с международными и отечественными рекомен-
дациями [1, 2, 4, 5].
ПРИГОТОВЛЕНИЕ ПРЕПАРАТОВ 
ДЛЯ МИКРОСКОПИИ
Основным видом диагностического материа-
ла для проведения прямого микроскопического 
исследования методом Циля-Нильсена является 
мокрота. Качественным материалом можно счи-
тать свежевыделенную мокроту, имеющую сли-
зистый или слизисто-гнойный характер, а также 
содержащую плотные белесоватые включения. 
Достаточный объем образца мокроты для ис-
следования составляет 3–5 мл, хотя и меньшее 
количество может оказаться достаточным при 
удовлетворительном качестве.
Наибольшая вероятность найти КУМ в не-
концентрированном диагностическом матери-
але представляется при исследовании плотных 
и твердых комочков в мокроте, и результат 
прямого микроскопического исследования 
в большой степени зависит от выбора имен-
но этих комочков. В связи с этим, необходимо, 
чтобы материал поступал в лабораторию в од-
норазовых пластиковых прозрачных контейне-
рах объемом 20–50 мл. Использование таких 
контейнеров позволяет легко оценить качество 
и объем собранного материала, а при приго-
товлении мазков для микроскопии – проводить 
выбор гнойных комочков непосредственно из 
контейнера, избегая чрезвычайно эпидемиче-
ски опасного этапа выливания мокроты в чаш-
ку Петри.
Приготовление препаратов для микроскопи-
ческого исследования является одной из наибо-
лее эпидемически опасных процедур, поскольку 
в процессе подготовки материала для иссле-
дования создается высокий риск образования 
аэрозолей с диаметром частиц от 1 до 5 мкм, 
которые способны проникать в легочные альве-
олы и оседать в них, формируя очаг инфекции. 
Поэтому приготовление препаратов рекоменду-
ется проводить в вытяжном шкафу или (предпоч-
тительно) в боксе биологической безопасности 
очередь – это M. tuberculosis, являющиеся воз-
будителем ТБ, а также другие важные виды МБ, 
вызывающие заболевания человека, к которым 
в настоящее время относятся около 40 видов 
микобактерий, таких как M. bovis, M. africanum 
M. avium complex, M. abscessus, M. leprae, 
M. kansasii, M. marinum, 
и другие.
Характерной особенностью МБ являет-
ся наличие чрезвычайно устойчивой к внеш-
ним воздействиям гидрофобной клеточной 
стенки, что обуславливает такие свойства МБ, 
как кислото-, щелоче- и спиртоустойчивость. 
Выявление МБ методом микроскопии с окраской
по Цилю-Нильсену основано на способнос ти МБ 
к кислотоустойчивому окрашиванию (способ-
ность удерживать краситель даже после дли-
тельного обесцвечивания серной кислотой или 
солянокислым спиртом).
Наличие в клеточных стенках МБ большо-
го количества липидных веществ (миколовых 
кислот) препятствует проведению окрашива-
ния их общепринятым для бактерий методом 
Грама. МБ не окрашиваются обычными анили-
новыми красителями. Кислотоустойчивость вы-
является только с помощью специальных мето-
дов окраски, одним из которых является метод 
Циля-Нильсена. Принцип метода состоит в том, 
что при одновременном воздействии нагрева-
ния и сильного протравливающего вещества – 
фенола (карболовой кислоты), на котором го-
товится основное красящее вещество фуксин, 
облегчается проникновение анилинового краси-
теля в микробную клетку и, особенно, в структу-
ры ее клеточной стенки. Связывание красителя 
с пептидогликолипидами клеточной стенки уве-
личивает ее гидрофобность и способствует удер-
жанию красителя в цитоплазме. Последующее 
обесцвечивание мазка приводит к обесцвечива-
нию всех некислотоустойчивых структур. Только 
кислото- и спиртоустойчивые микроорганизмы 
стойко удерживают краситель и остаются после 
обесцвечивания окрашенными в малиново-крас-
ный цвет. Обесцвеченные элементы мазка до-
крашивают метиленовым синим. Помимо МБ, ме-
тод окраски по Цилю-Нильсену выявляет также 
и другие кислотоустойчивые бактерии, такие, на-
пример, как Nocardia и Rhodococcus.
Метод прямой микроскопии препаратов, 
окрашенных по Цилю-Нильсену, используется
в основном в клинико-диагностических лабо-
раториях для первичного выявления КУМ у лиц 
с подозрением на ТБ и другие микобактериаль-
ные инфекции. Кроме того, метод Циля-Нильсена 
применяется в бактериологических лаборато-
риях медицинских организаций, оказывающих 
специализированную медицинскую помощь по 

СЕВАСТЬЯНОВА Э.В., ЛАРИОНОВА Е.Е., АНДРИЕВСКАЯ И.Ю.
102
Вестник ЦНИИТ № 1 2019
с соблюдением всех общепринятых стандартных 
норм биобезопасности.
Препараты следует готовить в количестве, 
с которым удобно и безопасно работать. При их 
маркировке следует избегать касания пальцами 
поверхности предметных стекол. Номер наносят 
с помощью несмываемого маркера или восково-
го карандаша по стеклу с таким расчетом, чтобы 
в процессе окраски этот номер сохранился.