Химико биологическая серия 1 2014
ISSN 1811-184X. Вестник ПГУ
жүктеу/скачать 1,29 Mb. Pdf көрінісі
|
chimbiol 1 2014 (3) СТР 49
| ISSN 1811-184X. Вестник ПГУ
серия ХИМИКО - БИОЛОГИЧЕСКАЯ. 2014. № 1 46 47 Рисунок 4 – Мутированные сайты ДНК На рисунке 4 представлены данные по обработке и сопоставлению секвенированной ДНК с оригинальной матричной ДНК, кодирующей белок Importin β1, доказывающие наличие точечных мутаций в изучаемых сайтах фосфорилирования. ДНК с полученными мутациями использовали для трансфекции клеточной лини клеток MDA-MB-435 и изучения взаимодействия данного белка с киназой mTOR, рисунок 5. Рисунок 5 – Результаты белкового взаимодействия Importin β1 с киназой mTOR и основными регуляторами рибосомального транспорта Данные рисунка 5 показывают, что наличие мутаций в сайтах фосфорилирования у белка Importin β1 не влияют на уровень белкового взаимодействия с киназой mTOR. Это говорит о том, что данная киназа напрямую не взаимодействует с белком Importin β1 и не фосфорилирует его основные сайты. Кроме этого полученные мутации не влияют и на белковое взаимодействие с основными регуляторами рибосомального транспорта RanBP2 и RanGAP1, что говорит о важности белка Importin β1 в данном процессе. Сайт-направленный мутагенез ДНК, кодирующей белок RanBP2, проводили по трем сайтам: S1160, T1112 и S1160+T1112. Предварительно секвенированную ДНК с наличием генетических мутаций использовали для трансфекции клеточной линии MDA-MB-435 и изучали белковое взаимодействие между белками Importin β1 и RanBP2 методом иммунопреципитации. Результаты данной реакции представлены на рисунке 6. Рисунок 6 – Результаты белкового взаимодействия Importin β1 и RanBP2 Рассматривая полученные результаты можно сказать, что сайты фосфорилирования белка RanBP2 являются наиболее важными при рассмотрении процесса транспорта рибосомальных белков в ядро клетки. При мутации данных сайтов, не происходит взаимодействия данного белка с основным транспортным белком Importin β1, который отвечает за доставку рибосомальных белков в ядро клетки. Таким образом, полученные нами результаты позволяют сделать вывод, что киназа mTOR непосредственно участвует в регуляции импорта рибосомальных белков в ядро клетки и данный механизм происходит за счет фосфорилирования киназой mTOR основного регулятора рибосомального импорта RanBP2. |