О книге Special for Dabl-v aka Эукариот Фрида Карловна Черкес, Лина Борисовна Богоявленская, Наталья Александровна Бельская – Микробиология

Кровь следует брать натощак или не раньше чем через 6 ч после еды. В 
сыворотке крови после еды могут содержаться капельки жира, которые делают 
ее мутной и непригодной для исследования (такая сыворотка называется 
хилезной). 
Внимание! При взятии крови необходимо соблюдать правила асептики. 
Для получения сыворотки кровь оставляют на 1 ч при комнатной 
температуре или ставят в термостат при 37° С на 30 мин для образования 
сгустка. 
Внимание! Не следует держать сыворотку в термостате больше 30 мин - 
может произойти гемолиз, что помешает проведению исследований. 
Образовавшийся сгусток отделяют от стенок пробирки пастеровской 
пипеткой или петлей ("обводят"). Пробирку помещают в холодильник на 
некоторое время (обычно 1 ч, но не более 48 ч) для лучшего отделения 
сыворотки из сжавшегося на холоде сгустка. Затем сыворотку отсасывают 
стерильной пастеровской пипеткой, снабженной резиновым баллоном или 
шлангом. 
Отсасывать сыворотку следует очень осторожно, чтобы не захватить 
форменные элементы. Сыворотка должна быть совершенно прозрачной без 
примеси клеток. Мутные сыворотки еще раз отсасывают после того, как клетки 
осядут. Сыворотку можно освободить от форменных элементов 
центрифугированием. 
Внимание! На сгустке сыворотка может оставаться не более 48 ч при + 4° С. 
Для получения сыворотки кровь можно брать из прокола мякоти пальца или 
мочки уха пастеровской пипеткой. У грудных детей кровь берут из У-
образного разреза на пятке. 
При использовании пастеровской пипетки кровь насасывают в пипетку из 
прокола. Острый конец пипетки запаивают. Пипетку помещают в пробирку 
острым концом вниз. Чтобы он не сломался, на дно пробирки кладут кусочек 
ваты. Пробирку с соответствующей этикеткой направляют в лабораторию. 
Скопившуюся в широком конце пипетки сыворотку отсасывают. 
Иммунные сыворотки получают из крови людей или животных (чаще 
кроликов и лошадей), иммунизированных по определенной схеме 
соответствующим антигеном (вакциной). В полученной сыворотке 
определяют ее активность (титр), т. е. наибольшее разведение, в котором она 
реагирует с соответствующим антигеном в определенных условиях опыта. 
Готовят сыворотки обычно на производстве. Их разливают в ампулы, на 
которых указывают название и титр. В большинстве случаев сыворотки 

высушивают. Сухую сыворотку перед употреблением растворяют в 
дистиллированной воде до первоначального объема (тоже указан на этикетке). 
Хранят все сухие (лиофилизированные) диагностические" препараты при 4-
10° С. 
Для серологических исследований применяют иммунные сыворотки 
нативные (не адсорбированные) и адсорбированные. Недостаток нативных 
сывороток - наличие в них групповых антител, т. е. антител к 
микроорганизмам, имеющим общие антигены. Обычно такие антигены 
встречаются у микробов, принадлежащих к одной группе, роду, семейству. 
Адсорбированные сыворотки отличаются строгой специфичностью: 
реагируют только с гомологичным антигеном. Антитела к другим 
(гетерогенным) 
антигенам 
удалены 
адсорбцией. 
Титр 
антител 
адсорбированных сывороток низкий (1:40, 1:320), поэтому их не разводят
*
. 
*
(
В настоящее время методом биотехнологии получены особые клетки (гибридомы), вырабатывающие in 
vitro моноклональные антитела, т. е. антитела, реагирующие строго специфично (с одним антигеном).
) 
Реакция агглютинации 
Реакция агглютинация (РА) - это склеивание и выпадение в осадок микробов 
или других клеток под действием антител в присутствии электролита 
(изотонического раствора натрия хлорида). Образовавшийся осадок называют 
агглютинатом. Для реакции необходимы: 
1. Антитела (агглютинины) - находятся в сыворотке больного или в 
иммунной сыворотке. 
2. Антиген - взвесь живых или убитых микроорганизмов, эритроцитов или 
других клеток. 
3. Изотонический раствор. 
Реакцию агглютинации для серодиагностики широко применяют при 
брюшном тифе, паратифах (реакция Видаля), бруцеллезе (реакция Райта) и др. 
Антителом при этом является сыворотка больного, а антигеном - известный 
микроб. 
При идентификации микробов или других клеток антигеном служит их 
взвесь, а антителом - известная иммунная сыворотка. Эту реакцию широко 
применяют при диагностике кишечных инфекций, коклюша и др. 
Подготовка ингредиентов: 1) получение сыворотки см. с. 200; 2) 
приготовление антигена. Взвесь живых микробов должна быть гомогенной и 
соответствовать (в 1 мл) примерно 30 ед. мутности по оптическому стандарту 
ГИСК. Для ее приготовления обычно используют 24-часовую культуру, 
выращенную на скошенном агаре. Культуру смывают 3-4 мл изотонического 

раствора, переносят в стерильную пробирку, определяют ее густоту и, если 
нужно, разводят. 
Применение взвеси убитых микробов - диагностикумов - облегчает работу 
и делает ее безопасной. Обычно пользуются диагностикумами, 
приготовленными на производстве. 
Постановка реакции. Существует два метода проведения этой реакции: 
реакция агглютинации на стекле (иногда ее называют ориентировочной) и 
развернутая реакция агглютинации (в пробирках). 

жүктеу/скачать 14,39 Mb.

Достарыңызбен бөлісу: