О книге Special for Dabl-v aka Эукариот Фрида Карловна Черкес, Лина Борисовна Богоявленская, Наталья Александровна Бельская – Микробиология
жүктеу/скачать 14,39 Mb. Pdf көрінісі
|
8dccb36
- Бұл бет үшін навигация:
- Возможные ошибки при постановке реакции агглютинации
| Агглютиноскоп - прибор, состоящий из полой металлической трубки,
укрепленной на подставке. Сверху на ней расположен окуляр с регулирующим винтом. Под трубкой прикреплено вращающееся зеркало. Пробирку с изучаемой жидкостью вставляют сбоку в отверстие трубки на такое расстояние, чтобы находящаяся в ней жидкость была под окуляром. Установив с помощью зеркала освещение и сфокусировав окуляр, определяют наличие и характер агглютината. При положительном результате реакции в пробирках видны зерна или хлопья агглютината. Агглютинат постепенно оседает на дно в виде "зонтика", а жидкость над осадком просветляется (сравните с равномерно мутным контролем антигена). Для изучения величины и характера осадка содержимое пробирок слегка встряхивают. Различают мелкозернистую и хлопьевидную агглютинацию. Мелкозернистая (О-агглютинация) получается при работе с О-сыворотками * . Хлопьевидная (Н) - при взаимодействии подвижных микроорганизмов со жгутиковыми Н-сыворотками. * ( О-сыворотки содержат антитела к О (соматическому)-антигену, Н-сыворотки - к жгутиковому. ) Хлопьевидная агглютинация наступает быстрее, образующийся при этом осадок очень рыхлый и легко разбивается. Интенсивность реакции выражают следующим образом: ++++ все клетки осели, жидкость в пробирке совершенно прозрачна. Результат реакции резко положительный. +++ осадок меньше, нет полного просветления жидкости. Результат реакции положительный. ++ осадок еще меньше, жидкость мутная. Результат реакции слабо положительный. + незначительный осадок, жидкость мутная. Сомнительный результат реакции. - осадка нет, жидкость равномерно мутная, как в контроле антигена. Отрицательный результат реакции. Возможные ошибки при постановке реакции агглютинации. 1. Спонтанная (самопроизвольная) агглютинация. Некоторые клетки, особенно микробы в R-форме, не дают однородной (гомогенной) взвеси, быстро выпадают в осадок. Во избежание этого следует пользоваться культурой в S- форме, которая не дает спонтанной агглютинации. 2. В сыворотке здоровых людей имеются антитела к некоторым микроорганизмам (так называемые "нормальные антитела"). Титр их невысок. Поэтому положительный результат реакции в разведении 1:100 и выше говорит о ее специфичности. 3. Групповая реакция с близкими по антигенному строению микробами. Например, сыворотка больного брюшным тифом может также агглютинировать бактерии паратифа А и Б. В отличие от специфической групповая реакция идет в более низких титрах. Адсорбированные сыворотки не дают групповой реакции. 4. Следует учесть, что специфические антитела после перенесенной болезни и даже после прививок могут сохраняться длительное время. Они называются "анамнестическими". Чтобы отличить их от "инфекционных" антител, образующихся в течение текущей болезни, реакцию ставят в динамике, т. е. исследуют сыворотку больного, взятую повторно через 5-7 дней. Повышение титра антител говорит о наличии болезни - титр "анамнестических" антител не повышается, а может даже снизиться. Контрольные вопросы 1. Что такое реакции иммунитета, каковы их основные свойства? 2. Какие компоненты участвуют в серологических реакциях? Почему реакции называют серологическими, из скольких фаз они состоят? 3. Что такое реакция агглютинации? Ее использование и методы проведения. Что такое диагностикум? 4. Каким антигеном пользуются при исследовании сыворотки больного? Какой сывороткой определяют вид неизвестного микроба? 5. Что такое О- и Н-агглютинация? В каких случаях образуется хлопьевидный осадок и когда мелкозернистый? Задание 1. Поставьте развернутую реакцию агглютинации для определения титра антител в сыворотке больного и учтите ее результат. 2. Поставьте реакцию агглютинации на стекле для определения вида выделенного микроорганизма. Реакция гемагглютинации В лабораторной практике пользуются двумя различными по механизму действия реакциями гемагглютинации (РГА). |