Часть 2. Частные вопросы биотехнологии. Клеточная биотехнология
112
лунках с культурой. Используют по четыре лунки на каждое разведение
вируса, начиная с разведения, соответствующего 0,1 условных единиц
активности с коэффициентом разведения ×10.
После внесения индикаторного вируса и титрования его дозы,
культуру клеток инкубируют при температуре (37,0 ±1,0)°С, (5,0±0,5) %
СО
2
и (70±5) % влажности.
Учет определения активности интерферона осуществляет через 24–
48 часов, когда доза внесенного вируса соответствует 100 условным
единицам активности. Учет результатов проводят в случае отсутствия
дегенерации в контрольной культуре. За титр интерферона принимают
величину, обратную разведению препарата, при котором клеточная
культура в 50 % лунок оказалась полностью защищенной от
цитопатического действия вируса.
Пересчет активности интерферона (X) в МЕ выполняется по
формуле:
Специфическую безопасность проверяют на животных (тест
«токсичность») и на культурах клеток, которые используются в
определении противовирусной активности. Для этого односуточный
монослой вносят в планшеты, добавляют ту же питательную среду, что и
для определения активности, и разведения интерферона-α. Инкубируют в
течение трех суток при условиях, описанных выше. Не должно быть
разрушения клеток. В контроле без определяемого вещества
(отрицательный контроль) также не должно быть разрушения клеток.
