Схема получения рекомбинантного инсулина (фирма «Eli Lilli», США): 1 этап. Путем химического синтеза были созданы последовательности
нуклеотидов, которые кодируют образование А- и В-цепей, т.е. созданы
синтетические гены. Это этап получения нужных генов.
2 этап. Каждый из синтетических генов вводят в плазмиды (в одну
плазмиду вводят ген, синтезирующий цепь А, в другую плазмиду вводят
ген, синтезирующий цепь В). Это этап конструирования рекДНК.
3 этап. Вводят ген, кодирующий образование фермента
бетагалактозидазы. Этот ген включают в каждую плазмиду для того, чтобы
добиться бурной репликации плазмид (интенсификация процесса
репликации). Этот этап также относится к конструированию рекДНК.
4 этап. Вводят плазмиды в клетку Escherichia coli – кишечной палочки
– и получают две культуры продуцента, одна культура синтезирует А-цепь,
вторая В-цепь. Данный этап относится к генетической трансформации.
Затем проводят молекулярную селекцию, связанную с идентификацией
рекомбинатных бактерий.
5 этап. Помещают две культуры в ферментер. В среду добавляют
галактозу, которая индуцирует образование фермента бетагалактозидазы.
При этом плазмиды активно реплицируются, образуя много копий плазмид
и, следовательно, много генов, синтезирующих А и В цепи. Среда для
выращивания трансгенного штамма – L-бульон (содержит натрия хлорид,
кальция хлорид, магния сульфат, фосфаты, глюкозу). Условия
культивирования: 30ºС; рН около 7,0; перемешивание и аэрация
