С курсом факультета повышения квалификации и переподготовки кадров


Схема получения рекомбинантного инсулина (фирма «Eli Lilli», США)



Pdf көрінісі
бет328/375
Дата31.12.2021
өлшемі2,61 Mb.
#21760
1   ...   324   325   326   327   328   329   330   331   ...   375
Байланысты:
Farmatsevticheskaia biotekhnologiia Moiseev-DV 2020

Схема получения рекомбинантного инсулина (фирма «Eli Lilli», США): 
1 этап. Путем химического синтеза были созданы последовательности 
нуклеотидов,  которые  кодируют  образование  А-  и  В-цепей,  т.е.  созданы 
синтетические гены. Это этап получения нужных генов. 
2  этап.  Каждый  из  синтетических  генов  вводят  в  плазмиды  (в  одну 
плазмиду  вводят  ген,  синтезирующий  цепь  А,  в  другую  плазмиду  вводят 
ген, синтезирующий цепь В). Это этап конструирования рекДНК. 
3  этап.  Вводят  ген,  кодирующий  образование  фермента 
бетагалактозидазы. Этот ген включают в каждую плазмиду для того, чтобы 
добиться  бурной  репликации  плазмид  (интенсификация  процесса 
репликации). Этот этап также относится к конструированию рекДНК. 
4 этап. Вводят плазмиды в клетку Escherichia coli – кишечной палочки 
– и получают две культуры продуцента, одна культура синтезирует А-цепь, 
вторая  В-цепь.  Данный  этап  относится  к  генетической  трансформации. 
Затем  проводят  молекулярную  селекцию,  связанную  с  идентификацией 
рекомбинатных бактерий. 
5  этап.  Помещают  две  культуры  в  ферментер.  В  среду  добавляют 
галактозу,  которая  индуцирует  образование  фермента  бетагалактозидазы. 
При этом плазмиды активно реплицируются, образуя много копий плазмид 
и,  следовательно,  много  генов,  синтезирующих  А  и  В  цепи.  Среда  для 
выращивания трансгенного штамма – L-бульон (содержит натрия хлорид, 
кальция  хлорид,  магния  сульфат,  фосфаты,  глюкозу).  Условия 
культивирования:  30ºС;  рН  около  7,0;  перемешивание  и  аэрация 



Достарыңызбен бөлісу:
1   ...   324   325   326   327   328   329   330   331   ...   375




©emirsaba.org 2024
әкімшілігінің қараңыз

    Басты бет