Сборник научных трудов по материалам
жүктеу/скачать 3,44 Mb. Pdf көрінісі
|
|
Результаты и обсуждение В работе использовали наночастицы диоксида титана в кристалличе- ской форме анатаз (~5 нм). Обработка TiO 2 наночастиц полилизином приво- дит к образованию конъюгата TiO 2 •PL [1, с. 87]. Синтез нанокомпозитов TiO 2 •PL±siRNA. В качестве siRNA мы ис- пользовали комплементарный дуплекс 21-звенных олигонуклеотидов, направленных на консервативную последовательность кодирующего участка РНК сегмента 5 вируса гриппа А: 3’(dTT)GAGGCUUCUUUAUUCUAGG 5’CUCCGAAGAAAUAAGAUCC(dTT) Иммобилизацию siRNA на наночастицы проводили путем добавления дуплекса к суспензии TiO 2 •PL в 0.1 M NaCl, при соблюдении соотношения количества аминогрупп в полилизине к фосфатным группам в siRNA, равным не менее 5. После перемешивания реакционной смеси в течение 30 мин и промывания полученных частиц получали нанокомпозиты TiO 2 •PL±siRNA с емкостью по каждой из цепей РНК ~20 нмол/мг. По всей вероятности, siRNA связываются с TiO 2 •PL благодаря электростатическому взаимодействию по- ложительно заряженных аминогрупп полилизина с отрицательно заряжен- ными фосфатными группами в сахаро-фосфатном остове молекул РНК. 46 TiO 2 •PL + + siRNA – TiO 2 •PL±siRNA Чтобы продемонстрировать, что обе цепи РНК фиксируются на поверх- ности наночастиц, в одну из них была введена флуоресцентная метка (остаток флуоресцеина), а в другую радиоактивная метка ( 32 P). Иммобилизацию дуп- лекса [ 32 P]RNA/ Flu RNA на TiO 2 •PL детектировали по разнице интенсивности флоуресценции и радиоактивности в супернатанте до и после иммобилиза- ции. Выход иммобилизации обеих цепей РНК был достаточно высоким (85-90%). TiO 2 •PL±siRNA нанокомпозиты устойчивы при хранении при 4 о С, по крайней мере, в течение нескольких месяцев без признаков десорбции нук- леотидного материала. жүктеу/скачать 3,44 Mb. Достарыңызбен бөлісу:
|