Сборник научных трудов по материалам
жүктеу/скачать 3,44 Mb. Pdf көрінісі
|
| 2
•PL±siRNA 5 мкг/мл подавление репродукции вируса происходит на 99,96% (в 2500 раз). Таким обра- зом, продемонстрировано эффективное ингибирование репродукции вируса гриппа с по- мощью siRNA, доставленной в клетки в составе созданных нанокомпозитов. Ключевые слова: siRNA, иммобилизация, наночастицы диоксида титана, наноком- позиты, ингибирование вируса гриппа А. Способность малых интерферирующих РНК (short interfering siRNA) [16, p. 6151] специфично и с высокой эффективностью расщеплять РНК- мишени позволяет рассматривать их в качестве потенциальных терапевтиче- ских препаратов, действие которых основано на подавлении экспрессии не- желательных генов, вызывающих различные генетические, вирусные и онко- логические заболевания. Феномен siRNA был впервые описан 17 лет назад [6, p. 806]. Было по- казано, что синтетические siRNA могут быть использованы для расщепления РНК в клетках [4, p. 428]. Это вызвало волну интереса к siRNA как агентам для биомедицинских исследований с целью создания нового поколения ле- карственных препаратов. Было продемонстрировано использование siRNA для подавления экспрессии различных генов в клеточных культурах и на мо- дельных животных [11, p. 4158]. siRNA также интенсивно исследуются как противовирусные агенты [например, 18, p. e5671; 22, p. 421]. Исследования на самых различных модельных системах подтвердили эффективность siRNA в качестве потенциальных лекарственных препаратов, однако использование этих соединений в медицинской практике пока не нашло применения. Основным затруднением является отсутствие эффектив- ного способа доставки siRNA (как и других соединений на основе нуклеино- вых кислот) к гену-мишени в клетке. Известно, что олигонуклеотиды сами по себе обладают весьма низкой эффективностью проникновения, в первую очередь, из-за гидрофобного ха- рактера клеточной мембраны. Для доставки олигонуклеотидов в клетки ис- пользуются такие приемы как электропорация и транспортные системы: включение в липосомы, конъюгирование с полимерами различной природы, и др. Наиболее полно эти методы описаны в обзоре [9, p. 197]. Нанобиотех- нология, развивающаяся бурными темпами, в последнее время, также внесла свой вклад в решение проблемы доставки [15, p. 147]. Наночастицы диоксида титана привлекают особое внимание благодаря их биосовместимости, стабильности и возможности модификации поверхно- сти для иммобилизации различных соединений [14, p. 331]. Множество работ in vitro и in vivo направлены на изучение потенциала этих наночастиц для увеличения эффективности действия терапевтических агентов в раковых клетках, для решения проблем стабильности некоторых лекарств, а также для 45 адресной доставки лекарств и их последующего контролируемого высвобож- дения [17, p. 1278; 13, p. 1383; 21, p. 1952]. Помимо этого, наночастицы по- могают обеспечивать защиту вводимого лекарства на основе нуклеиновых кислот от действия внутриклеточных нуклеаз [3, c. 4]. Известно, что наночастицы диоксида титана (~5 нм) проникают через клеточную мембрану [19, p. 3018; 20, p. 123]. Диоксид титана широко ис- пользуется в медицине и косметике как биосовместимый и нетоксичный ма- териал. Согласно Американскому Управлению по контролю за продуктами и лекарствами (FDA, США) диоксид титана признан в 1966 г. как безопасное и безвредное для человека вещество. Показано, что TiO 2 -наночастицы в относительно низких дозах (до 0.2 мг/мл) не токсичны для клеток [10, p. 2699], бактерий [7, p. 1308] и животных [5, p. 151]. Дополнительные обработки наночастиц приводят к су- щественному уменьшению их токсичности. Показано, например, что обра- ботка TiO 2 -наночастиц после их получения глицидилизопропиловым эфиром делает их практически нетоксичными для клеток (цитотоксичность не пре- вышает естественную гибель клеток MDCK) [8, p. 241]. Именно такие нано- частицы использованы в данной работе. Ранее мы разработали способ создания нанокомпозитов на основе на- ночастиц диоксида титана путем электростатического связывания олигонук- леотидов (ДНК-фрагментов) с аминогруппами полилизина, предварительно иммобилизованного на наночастицах [1, с. 87] и показали, что созданные нанокомпозиты проявляют антивирусные свойства в клеточной системе [2, с. 196]. Целью данной работы было создание нанокомпозитов, несущих корот- кие интерферирующие РНК и исследование их биологической активности на примере подавления репродукции вируса гриппа А в клетках. жүктеу/скачать 3,44 Mb. Достарыңызбен бөлісу:
|