Тақырыбы: «азық-ТҮЛІК ШИКІЗАТЫ МЕН азық-ТҮлік өнімдерінде гидролитикалық ферменттерді анықтау әдістері»

жүктеу/скачать 213,72 Kb.

бет	2/3
Дата	18.11.2022
өлшемі	213,72 Kb.
	#51140

1 2 3

Гидролитические ферменты
Определение активности арил-, карбоксил- и холинэстераз
Сущность метода. Использование газометрического метода, основанного на гидролизе этими ферментами трибутирина. Образуемые СЖК при реакции с бикарбонатом натрия образуют диоксид углерода. Для того чтобы определить активность ферментов в отдельности, используют соответствующие ингибиторы (Shahani К. М., Harper W. J. et al.). Одна единица активности соответствует такому количеству фермента в 1 мл молока, которое катализирует реакцию со скоростью образования 1 мл диоксида углерода в течение 30 мин при принятых условиях проведения реакции.
Для определения активности арилэстеразы применяют титриметрический метод, сущность которого состоит в гидролизе этим ферментом фенилацетата, в результате чего образуется уксусная кислота, которую определяют титрованием раствором щелочи (Marquardt R. R. et al.).
Аппаратура, материалы, реактивы. Баня водяная с температурой нагрева (37 ± 1)°С; колбочки стеклянные вместимостью 50 мл и мерные вместимостью 100 мл; пипетки вместимостью 5; 10 мл; бюретки вместимостью 5; 10 мл; капельница; дигидро-орто-фосфат калия – 0,1 М раствор; фенилацетатная эмульсия – 0,3 М раствор (13,5 г фенилацетата и 6 г тритона Х-155 растворяют в мерной колбочке вместимостью 100 мл, в которую пипеткой отмеривают 8 мл аравийской камеди – 2,5 % в/об. и доводят объем до метки водой); NaOH – 0,1 или 0,2 н. раствор; фенолфталеин – 0,1%-ный спиртовой раствор; вода дистиллированная.

Сущность метода. Выдерживание смеси молока с тем или иным субстратом и дальнейшее прямое титрование выделившихся СЖК (метод рН-стат) или титрование СЖК, экстрагированных из молока, различными органическими растворителями.
В пробирку (рабочую) вместимостью 30 мл отмеривают 15 мл обезжиренного молока (полученного путем центрифугирования цельного молока при 3000 g и температуре 15...20°С) и помещают в водяную баню с температурой (37±2)°С на 10 мин.
Затем в эту же пробирку отмеривают 5 мл трибутирина, закрывают пробкой и сильно встряхивают в течение 5 с. Полученную эмульсию помещают в стеклянную ячейку вместимостью 100 мл (термостатируемую водой при (37±2)°С), содержащую 15 мл воды, и ополаскивают пробирку 5 мл воды, помещая ее в ту же ячейку.

Определение активности липазы

В ячейку погружают электроды рН-метра, а над поверхностью пропускают азот со скоростью около 100 мл/мин. Путем добавления по каплям 0,025 и 0,1 н. растворов КОН достигают величины рН смеси реагентов, равной 8,8, и замечают время. Величину рН 8,8 поддерживают путем автоматического добавления к смеси реагентов по каплям 0,04 н. раствора КОН каждую минуту в течение 10 мин. Аналогично проводят контрольную пробу, но с молоком, подвергнутым тепловой обработке при 80 °С в течение 3 мин.

жүктеу/скачать 213,72 Kb.

Достарыңызбен бөлісу:

1 2 3