Утверждено
жүктеу/скачать 4,59 Mb. Pdf көрінісі
|
ООП 06.03.01 Биология Ботаника очная 2020
| Правильный ответ:
Технология рекомбинантных молекул ДНК (молекулярное клонирование, генная инженерия или генетическая инженерия) ― совокупность экспериментальных процедур, позволяющая осуществлять перенос генетического материала из одного организма в другой. Работы в области генетической инженерии (генно-инженерные проекты) включают основные этапы: 1 ― получение нужного гена (целевого гена, гена-мишени); 2 ― встраивание гена-мишени в генетический элемент (генетический вектор), способный к репликации, с образованием рекомбинантной ДНК (рДНК); 3 ― введение рекомбинантной ДНК (гена, входящего в состав вектора) в клетку хозяина (целевую клетку, организм-реципиент); 4 ― идентификация (скрининг и селекция) целевых клеток, несущих рекомбинантную ДНК (ген-мишень). Ген-мишень (целевой ген) можно получить несколькими способами: путем его выделения из изолированной ДНК с помощью рестрицирующих эндонуклеаз; путем химико-ферментативного синтеза олигонуклеотидов с их последующей сшивкой; воссозданием гена на основе изолированной мРНК с помощью РНК- зависимой ДНК-полимеразы (обратной транскриптазы); а также методом полимеразной цепной реакции. Генетические векторы ― это, как правило, кольцевые молекулы ДНК, способные к самостоятельной репликации. В качестве векторов используют плазмиды и вирусы. Более широкое применение нашли бактериальные плазмиды, особенно плазмиды Escherichia coli ( E. coli ). Векторы для клонирования (клонирующие векторы) конструируют специально, вводя в них участки (сайты) узнавания рестриктаз, «разрезающих» полинуклеотидные цепи кольцевых молекул векторов. Линеаризованная молекула вектора содержит «липкие» (комплементарные) концы, взаимодействующие с «липкими» концами гена-мишени. Комплементарные концы вектора и гена сшивают ДНК-лигазой, и полученная рекомбинантная ДНК замыкается с образованием единой кольцевой молекулы. При конструировании векторов в них вводят гены-маркеры, кодирующие легко распознаваемые признаки, по которым на четвертом этапе генно-инженерного проекта можно отобрать клетки-носители вектора. Рекомбинантную ДНК вводят в хозяйскую (бактериальную) клетку по механизму трансформации. Искусственное введение в эукариотические клетки изолированных молекул ДНК называют трансфекцией. Идентификацию реципиентных клеток, которые приобрели целевой ген, проводят в две стадии. На первой стадии по генам-маркерам отбирают клетки, несущие вектор, а на второй ― клетки, несущие и вектор, и нужный ген. Для этого используют методы, основанные на непосредственном анализе ДНК целевых клеток, а также методы идентификации признака (белкового продукта), кодируемого геном-мишенью. жүктеу/скачать 4,59 Mb. Достарыңызбен бөлісу:
|