157. Схема постановски РСК
Компоненты реакции
|
При массовых испытаниях
|
Для испытания проб в трех пробирках
|
Пробирки с испытуемыми сыворотками
|
Контроль гемолитической системы
|
Пробирки для каждой испытуемой сыворотки
|
Контроль гемолитической системы
|
1
|
2
|
3
|
Испытуемая сыворотка
|
0,04
|
-
|
0,04
|
0,04
|
0,02
|
-
|
Физиологический раствор
|
0,16
|
0,6
|
0,36
|
0,16
|
0,18
|
0,6
|
Инактивация сывороток в водяной бане при температуре 600 30 мин
|
Антиген в рабочем титре
|
0,2
|
-
|
-
|
0,2
|
0,2
|
-
|
Комплемент в рабочем разведении
|
0,2
|
-
|
0,2
|
0,2
|
0,2
|
-
|
Водяная баня при температуре от +37 до +38°Cна 20 минут
|
Гемолитическая система
|
0,4
|
0,4
|
0,4
|
0,4
|
0,4
|
0,4
|
Водяная баня при температуре от +37 до +38°Cна 20 минут
| 158. Схема постановки РА Реакцию агглютинации проводят в объеме 1 мл в четырех разведениях (классический метод):при исследовании сывороток крови КРС и лошадей – 1:50, 1:100, 1:200 и 1:400;при исследовании сывороток крови овец, коз, верблюдов, буйволов, оленей и собак – 1:25, 1:50, 1:100 и 1:200;при исследовании сывороток крови пушных зверей и морских свинок – 1:10, 1:20, 1:40 и 1:80.В пробирках первого ряда готовим основное разведение. При исследовании сывороток крови КРС, лошадей вносит в пробирки испытуемые сыворотки в дозировке 0,1 мл и добавляет к ней соответствующий фенолизированный раствор хлорида натрия в дозировке 2,4 мл (разведение 1:25);при исследовании сывороток крови овец, коз, верблюдов, буйволов, оленей, собак вносит в пробирки испытуемые сыворотки в дозировке 0,2 мл и добавляет к ней соответствующий фенолизированный раствор хлорида натрия в дозировке 2,3 мл (разведение 1:12,5); при исследовании сывороток крови пушных зверей и морских свинок вносит в пробирки испытуемые сыворотки в дозировке 0,3 мл и добавляет соответствующий фенолизированный раствор хлорида натрия в дозировке 1,2 мл (разведение 1:5); вносит в пробирки третьего, четвертого и пятого рядов соответствующий фенолизированный раствор хлорида натрия в дозировке 0,5 мл;затем из пробирок первого ряда переносит в пробирки второго и третьего рядов в дозировке 0,5 мл основное разведение сывороток (1:25; 1:12,5; 1:5 в зависимости от вида исследуемых животных), в пробирках третьего ряда смешивает сыворотки с фенолизированным раствором хлорида натрия;переносит из третьего ряда полученное разведение сывороток в дозировке 0,5 мл в пробирки четвертого ряда и смешивает сыворотки с фенолизированным раствором хлорида натрия;из четвертого ряда переносит полученное разведение сывороток в дозировке 0,5 мл в пробирки пятого ряда и смешивает сыворотки с фенолизированным раствором хлорида натрия;удаляет из пробирок пятого ряда жидкость в дозировке 0,5 мл.По завершению внесения испытуемых сывороток в каждую пробирку второго, третьего, четвертого и пятого рядов с разведенными сыворотками вносим при помощи одноканального дозатора или аппарата Флоринского антиген в дозировке 0,5 мл, предварительно разведенного соответствующим фенолизированным раствором хлорида натрия (разведение 1:10).В пробирки первого ряда антиген не вносится, и данные пробирки служат контролем качества сыворотки. При наличии хлопьев, фибрина, эритроцитов и посторонних примесей результаты реакции агглютинации не учитывают. Разведение сывороток в каждой пробирке удваивается, и в зависимости от вида исследуемых животных составляет соотношения:1:50, 1:100, 1:200 и 1:400 (КРС, лошади);1:25, 1:50, 1:100 и 1:200 (овцы, козы, верблюды, буйволы, олени, собаки);1:10, 1:20, 1:40 и 1:80 (пушные звери, морские свинки).Для каждой партии проб одновременно с испытуемыми сыворотками ставим контроли в два столбца:с негативной сывороткой в аналогичных разведениях и последовательности, как с испытуемыми;с позитивной бруцеллезной сывороткой в разведениях до ее предельного титра. Контроль ставится один раз для всей партии проб. После внесения к испытуемым и контрольным сывороткам антигена, штативы с пробирками:осторожновстряхивают;помещают в термостат при температуре от +37 до +38°C на 16-20 часов;выдерживают при комнатной температуре в течение 60 минут. Учет результатов
Достарыңызбен бөлісу: |
