178. Перечислите серологические классические методы диагностики при бруцеллезе. РСК, РБП, РА.
179. Пример расчета компонентов при постановке реакции связывания комплемента. Например: 532 пробы сыворотки крови для исследования на бруцеллез. Начинаем с расчета компонентов для титрации комплемента и проверки компонентов на антикомплементарность и гемотоксичность. Для титрования комплемента в БС разведении 1:20 (0,55 К + 10,45 физ р-ра) 0,55*100д=55 доз К. Рабочий титр К=0,10
Ag = 532пр+20т+4акгт+4к = 560*0,2 = 112/75раб.титр = 1,5/1000=0,0015 л
K = 532+6к = 538*0,2 = 107,6мл физ р-ра
538*0,10 р.титр/20=2,69*200 доз в ампуле=538 доз
Г = 532+40т+6к+2акгт = 578*0,2=115,6 мл ф р/1000 уд титр=0,1156*10000 доз в ампуле=1156доз
Э = 532+40т+5акгт+6к= 583*0,2=116,6*2,5/100=2,9 мл
Sпоз= 1т+0,1 = 1,1/1000=0,0011 л
Sнег= 1т+0,1к=1,1/1000 = 0,0011л
NaCl = 532+62,6(40т+11,6 доп.ряд+6к+5акгт) = 594,6*0,85/100 = 5,054гр*1000=0,005054кг
Всего затрачено: Ag = 0,0015л, К = 593 д, Г = 1156 д, S поз/нег = 0,0011л.
180. Принцип работы на ИФА.Для серодиагностике используются 96 луночные полистирольные планшеты, на дне лунок которых заранее адсорбируется антиген. Исследуемая сыворотка вносится в лунки планшета. При этом гомологичные антигену антитела прикрепляются к нему. Не прикрепившиеся антитела удаляются промыванием. Далее в ячейки вносят антитела против иммуноглобулинов (антител), меченные ферментом. Если в исследуемой сыворотке присутствовали определяемые антитела, то они на этом этапе выступят в роли антигенов, с которыми прореагируют меченные антитела. Добавление после промывки хромогенного вещества (красителя) позволит учесть реакцию по развивающемуся окрашиванию в ячейках. Интенсивность окраски при этом пропорциональна количеству фермента, а следовательно количеству антител. При измерении оптическую плотности (ОП) жидкости в ячейке и сравнивании ее с контрольным образцом подсчитывается концентрация антител в единицах объема. Наиболее часто применяется подсчет результатов в единицах оптической плотности. Надо учитывать, что для каждой тест-системы есть свои показатели учета результатов и показатели нормы и патологии на которые надо ориентироваться при интерпретации результатов.
Иммуноферментный анализ – «иммуно» - относящийся к иммунитету, т.е. образуется комплекс « антиген +антитело», «ферментный» - ферментативная реакция, которая позволяет увидеть и измерить результат иммунной реакции.
Достарыңызбен бөлісу: |
