Окраска кислотоустойчивых бактерий по методу Циля-Нильсена Окраска по Граму Определить цель окраски по Граму
Мазок поместить на мостик для окрашивания
На мазок положить фильтровальную бумагу с генцианвиолетом так, чтобы закрыть весь препарат
Бумагу залить водой и окрашивать препарат 1 мин.
Пинцетом бумагу убрать
Нанести раствор Люголя на 1мин.
Мазок обработать спиртом и оставить на 30 сек.
Промыть водой, держа мазок вертикально
Нанести фуксин Пфейффера на 1 мин.
Мазок промыть водой и высушить фильтровальной бумагой.
5.Рост и размножение микробов, время генерации, фазы размножения. Под ростом клетки понимают координированное воспроизведение всех клеточных компонентов и структур, ведущее в конечном итоге к увеличению массы клетки. Термином ≪размножение≫обозначают увеличение числа клеток в популяции. Большинство прокариот размножаются поперечным делением, некоторые почкованием. При размножении микробной клетки наиболее важные процессы происходят в ядре (нуклеоиде), содержащем всю генетическую информацию в двунитевой молекуле ДНК. Репликация ДНК происходит полуконсервативным способом, обеспечивающим равномерное распределение генетического материала между дочерними клетками.
Надежность процесса репликации и правильность расхождения (сегрегация) дочерних цепей обеспечивается связью ДНК с цитоплазматической мембраной. Бактерии, как правило, характеризуются высокой скоростью размножения по сравнению с другими прокариотами. Скорость их размножения, помимо видовой принадлежности, зависит от состава питательной среды, pH, температуры, аэрации и других факторов. На плотных питательных средах бактерии образуют скопления клеток, называемые к о л о н и я м и . Размножение бактерий определяется временем генерации, т.е. периодом, в течение которого осуществляется деление клетки. Продолжительность генерации зависит от вида бактерий, возраста, популяции, состава питательной среды, температуры и других факторов. В оптимальных условиях время генерации у разных бактерий колеблется
довольно в широких пределах: от 20 мин. у кишечной палочки до 14 ч у микобактерий туберкулеза, в связи с чем их колонии образуются через 18-20 ч либо через 3-6 недель соответственно.Кривая роста бактерий в жидкой питательной среде. При выращивании бактерий в жидкой питательной среде наблюдается последовательная смена отдельных фаз в развитии популяции, отражающая общую закономерность роста и размножения бактериальных клеток.
I — исходная стационарная фаза начинается после внесения бактерий
в питательную среду. В течение данной фазы число бактериальных
клеток не увеличивается
II — лаг-фаза, или фаза задержки размножения
характеризуется началом интенсивного роста клеток, но скорость их
деления остается невысокой. Две первые фазы можно назвать периодом
адаптации бактериальной популяции, продолжительность которого
определяется возрастом культуры, а также количеством и качеством
питательной среды.
III — лог-фаза, или логарифмическая (экспоненциальная) фаза,
отличается максимальной скоростью размножения клеток
и увеличением численности бактериальной популяции в геометрической
прогрессии. Логарифмическая фаза у бактерий с коротким
временем генерации продолжается несколько часов.
IV — фаза отрицательного ускорения характеризуется
меньшей активностью бактериальных клеток и удлинением
периода генерации. Это происходит в результате истощения питательной
среды, накопления в ней продуктов метаболизма и дефицита
кислорода.