Схема исследования очищенной воды по методу мембранной фильтрации
Используемые материалы и питательные среды
|
Целлюлозно-нитратные фильтры:
для ОМЧ - тип фильтра: 14063; размер пор: 0,45 мкм; цвет фильтра: зеленый; цвет сетки: зеленый.
для ОЧГ - тип фильтра: 14069; размер пор: 0,65 мкм; цвет фильтра: серый; цвет сетки: белый.
для энтеробактерий, Pseudomonas aeruginosa, Staphylococcus aureus - тип фильтра: 14097, 14075, 14074; размер пор: 0,45 мкм; цвет фильтра: белый; цвет сетки: зеленый.
Питательные среды:
для определения общего микробного числа – R2А, 2 чашки Петри.
для определения дрожжевых и плесневых грибов – агар Sabouraud (Sab.), 2 чашки Петри.
для определения бактерии семейство Enterobacterеacae – агар Endo.
для определения Staphylococcus aureus – Staphylococcus agar.
для определения Pseudomonas aeruginosa – Pseudomonas agar.
Аппарат мембранной фильтрации:
фильтродержатель, воронки, крышки воронки, фритты, колба 5 л, пинцет, вакуумный насос, соединительные шланги
Дополнительно:
стерильная очищенная вода
ватный тампон
спирт этиловый 96%, 76%.
|
Отбор проб
|
Проба отбирается в стерильный флакон с завинчивающейся крышкой, объемом 200 мл, 500 мл.
Флакон открывают непосредственно перед отбором, во время отбора пробка и края емкости не должны чего-либо касаться.
Отбор воды из крана должен производится после спуска воды в течение 5 минут при полностью открытом кране.
Отобранную пробу маркируют, указывают дату и время отбора.
Заполняют Форму «Микробиологический контроль воды очищенной» – ФМ 13-01-01.
Объём пробы должен быть не менее 200 мл.
Исследования отобранной пробы следует провести в течение 2 часов после забора.
|
1 день исследования
|
Готовят рабочее место, протирают рабочий стол спиртом этиловым 76 % или дезинфицирующим раствором;
Лабораторные инструменты, помещают в лабораторный стакан с небольшим количеством спирта этилового 96 %.
Собирают аппарат мембранной фильтрации, устанавливают его в ламинарную кабину, подключают к сети, зажигают спиртовку и дальше работают при зажжённой спиртовке. Воронку одевают на основание фильтродержателя и надежно закрепляют зажимом.
Сначала нужно смочить стерильной очищенной водой фритты, налив в воронки небольшое количество стерильной воды. Открывают краны, удаляя воду, закрывают краны.
Достают профламбированным пинцетом стерильный мембранный фильтр вместе с прокладочным диском (защитная пленка) и снимают воронку, мембранный фильтр устанавливают на поверхность фритты, затем снимают пинцетом прокладочный диск.
Смачивают мембранные фильтры небольшим количеством стерильной очищенной воды. Открывают краны и удаляют воду, затем снова закрывают краны.
Для посева на среды R2A и Sab, наливают по 10 мл исследуемой очищенной воды в воронку и немедленно фильтруют, открыв кран.
Для посева на среды Staph. agar, Pseu. agar, Endo наливают по 100 мл исследуемой очищенной воды в воронку и немедленно фильтруют, открыв кран.
Каждый мембранный фильтр промывают тремя порциями, 100 мл каждая, стерильной водой.
После окончания фильтрования воронку снимают, фильтр осторожно поднимают за край фламбированным пинцетом и переносят его, не переворачивая, на питательную среду, разлитую в чашки Петри, избегая пузырьков воздуха между средой и фильтром. Поверхность фильтра с осевшими на ней бактериями должна быть обращена вверх.
Перед следующим фильтрованием обжигают воронки смоченным в 96% этиловым спирте ватным тампоном, затем ополаскивают, налив до крайней метки воронки стерильную очищенную воду.
Режим инкубации:
пит. ср. R2A при 350С, 4 суток.
пит. ср. Sab, при 230С, 5 суток.
пит. ср. Staph. agar, при 350С, 48ч.
пит. ср. Pseu.agar, при 350С, 48ч.
пит. ср. Endo, при 430C, 24ч.
|
2-5 дни исследования
|
Просмотр чашек, подсчет колонии,
описание колонии,
приготовление мазков,
окраска по Грамму,
микроскопирование,
идентификация.
|
Регистрация результатов,
оформление протоколов,
выдача протоколов.
|
Достарыңызбен бөлісу: |
