6В05102- «Биотехнология» мамандығы бойынша «Иммундық биотехнология» пәнінен №10 дәріс
Моноклоналды антиденелерді алудың схемасы
жүктеу/скачать 1,48 Mb.
|
10-лекция
| Моноклоналды антиденелерді алудың схемасы
Тышқандарға белгілі бір антиген - ақуыз, бактериялық жасушалар немесе жануарлар жасушалары қарқынды түрде иммунизацияланды. Олардың қанында антиденелер пайда болған кезде, олардан көкбауыр алынып, одан жасуша суспензиясы дайындалды (в лимфоциттері көп). Егер В-лимфоциттердің суспензиясына плазмоцитома жасушалары мен полиэтиленгликоль қосылса, онда жасушаларды біріктіру үшін талап етілетін инкубациядан кейін жүйеде мынадай жасушалар болды: -АОК және АОК будандары (В-лимфоциттер және В-лимфоциттер),
Мақсатты гибридоманы басқа специкалы гибридомалардан және реакцияға түспеген клеткалардан қалай бөліп алуға болады деген мәселе туындады. Осы мақсатқа жету үшін авторлар селективті қоректік ортада, яғни жасуша клонын таңдауға болатын ортада жасуша таңдауын қолданатын арнайы схема жасады. De novo нуклеотидтерінің синтезінің негізгі жолы жағдайында олар аминқышқылдары мен көмірсулардың прекурсорларынан түзіледі. Резервтік жолда нуклеотидтердің синтезі гипоксантиннен (пуриннен) немесе дезокситимидиннен (пиримидиннен) жүзеге асырылады. Гибридтердің метаболикалық селекциясы қалыпты соматикалық жасушалар (в лимфоциттері) нуклеотидтердің (пуриндер мен пиримидиндер) синтезінің екі метаболикалық жолын қолдана алатындығына негізделген: Негізгі жол Резервтік жол. Егер қандай да бір себептермен нуклеотид синтезінің негізгі метаболикалық жолы бұғатталса (мысалы, аминоптерин), онда қалыпты жасушаларда нуклеотид синтезінің резервтік жолы қолданылады.Бұл жағдайда гипоксантин гуанині фосфорибозилтрансфераза (г/ГФРТ) және тимидинкиназа (ТК) ферментінің жұмысына қосылады, бұл нуклеотидтердің қосалқы жол бойымен синтезін қамтамасыз етеді. Лимфоциттермен будандастыру үшін қолданылатын миелома жасушалары мутантты таңдап алынды, оларда г/ГФРТ ферменті синтезделмейді, яғни оларда нуклеотидтер синтезінің негізгі жолы ғана болды. Мұндай жасушалар нуклеотидтерді тек негізгі метаболизм жолымен синтездей алады. Егер өсіру ортасында жасушадағы нуклеотидтер синтезінің негізгі жолын блоктайтын зат - жүктеу/скачать 1,48 Mb. Достарыңызбен бөлісу:
|