«бекітемін» Жаратылыстану Факультетінің деканы Апендина А. К. 2022 ж
Биурет әдісімен ақуыздың массалық үлесін анықтау
жүктеу/скачать 245,49 Kb.
|
| Биурет әдісімен ақуыздың массалық үлесін анықтау.
Ақуыздың құрамына нақты реакция биурет реакциясы болып табылады, өйткені оны полипептидтік байланыстар береді. Ол өз атауын мочевина туындысынан алады-мыс сульфатының сілтілі ерітіндісінде боялған күрделі қосылыс түзетін биурет. Бояу қарқындылығы пептидтік байланыстардың құрамына, демек, ерітіндідегі ақуыз концентрациясына пропорционалды. Биурет реакциясын тетрапептидтерден бастап барлық ақуыздар, пептондар және полипептидтер береді. Бұл реакция ұзақ уақыт бойы ақуызға сапалы реакция ретінде қолданылған. Болашақта ол әртүрлі объектілердегі ақуызды сандық анықтау үшін қолданыла бастады. Биурет әдісі ақуызды алу шарттарымен, биурет реактивін енгізу әдістерімен және колориметрия техникасымен ерекшеленетін әртүрлі модификацияларда қолданылады. Төменде Дженнингс модификациясындағы ұндағы ақуыздың массалық үлесін анықтаудың биуреттік әдісі келтірілген. Материалдар, реактивтер, жабдықтар. Ұн (зерттеу нысаны); 10 н. КОН ерітіндісі; сегнет тұзы; дистилденген су; СиЅО4 4% ерітіндісі; СС14; 0,05 Н. КаОН ерітіндісі; сульфосалицил қышқылы; сыйымдылығы 1000 см3' өлшеуіш цилиндрлер; сыйымдылығы 250-300 см3 конустық колбалар; колба тығындары; бюреткалар; тамшуырлар; сыйымдылығы өлшеуіш колба 50 см3; таразы; механикалық шайқағыш; центрифуга; фотоэлектроколориметр; фотоэлектрлік нефелометр. Биурет реактивін дайындау. Реактив дайындау үшін 15 см3 10 н.кон ерітіндісі және ±0,01 г дәлдікпен алынған 25 г сегрегат тұзы алынып, сыйымдылығы 1000 см3 өлшеуіш колбада шамамен 900 см3 тазартылған суда ерітіледі. Бұл ерітіндіге цилиндрмен өлшенген Си8О4 4% ерітіндісінің 30 см3 тұрақты араластыруымен баяу қосылады. Колбаның көлемі тазартылған сумен белгіге дейін жеткізіледі. Талдау әдістемесі. ±0,001 г дәлдікпен шамамен 1,5 г ұн өлшенеді және сыйымдылығы 250-300 см3 құрғақ конустық колбаға салынады. Үлгіден май алу үшін төрт хлорлы көміртектің 0,1 см3 2 см3 бөліну бағасы бар цилиндрді тарту кезінде өлшейді және тамшуырмен 100 см3 биурет реактивін қосады. Тығынмен жабылған колба механикалық шайқағышта 60 минут шайқалады, содан кейін 4500 мин-1 айналу жиілігінде 10 минут центрифугаланады. Мөлдір центрифугат ерітінді қабатының қалыңдығы 5 мм болатын фотоэлектроколориметрдің кюветтеріне орналастырылады. Оптикалық тығыздықты өлшеу 550 НМ толқын ұзындығында жүзеге асырылады. Калибрлеу қисығы арқылы ақуыз сығындысының оптикалық тығыздығының шамасы бойынша мен (мг) ілмегіндегі ақуыздың массалық үлесі анықталады. Калибрлеу қисығы ұн суспензиясындағы ақуыздың массасы (мг) мен ерітіндінің оптикалық тығыздығы арасындағы байланысты білдіреді. Ақуыздың массалық үлесін есептеңіз (құрғақ заттардың массасына%). Калибрлеу қисығын құру. Калибрлеу қисығын құру үшін ақуыздың әртүрлі массалық үлесі бар ұн үлгілері нақты жағдайда кездесетін диапазонда таңдалады (8-ден 20% - ға дейін). Пайдаланылатын үлгілердегі ақуыз құрамындағы Интервал 1 % аспайтын шектерде болуы тиіс. Үлгілер саны кемінде 10 болуы керек. Олардың санының артуымен анықтамалардың дәлдігі артады. Содан кейін жоғарыдағы биурет әдісімен барлық үлгілердің ақуыз сығындыларының оптикалық тығыздығы анықталады. Абсцисса осіне қисық сызу кезінде оптикалық тығыздық шамалары, ал ординат осіне ілмектегі ақуыздың массалық үлесі (мг) қойылады. жүктеу/скачать 245,49 Kb. Достарыңызбен бөлісу:
|