Методические указания по написанию доклада Методические указания по текущей и промежуточной аттестации
Лабораторная работа №1. Количественное определение активности амилазы (по Вольгемуту). Специфичность действия амилазы слюны
жүктеу/скачать 177,5 Kb.
|
| 6.1 Лабораторная работа №1. Количественное определение активности амилазы (по Вольгемуту). Специфичность действия амилазы слюны
Опыт № 1 Определение активности амилазы в слюне по Вольгемуту Амилазная активность слюны или амилокластическая сила слюны выражается количеством 0,1 % раствора крахмала в мл, которое может расщепляться 1 мл слюны при температуре 38 °С в течении 30 мин. В норме амилазная активность слюны составляет 160-320 ед. Ход работы: В 10 пронумерованных пробирок наливают по 1 мл воды. Затем в первую пробирку добавляют 1 мл слюны, разведенной в 10 раз. Содержимое первой пробирки перемешивают и 1 мл раствора (суммарное разведение в 20 раз) переносят из 1-й пробирки во вторую, перемешивают (слюна разведена в 40 раз). Затем 1 мл разведенной слюны из второй переносят в третью и т.д. - из предыдущей пробирки в следующую. Из 10 пробирки 1 мл смеси выливают. Таким образом, получается ряд разведенной слюны, в котором в каждой последующей пробирки содержание фермента вдвое меньше, чем в предыдущей. Во все пробирки добавляют по 1 мл воды и по 2 мл 0,1 % раствора крахмала, перемешивают и помещают пробирки в термостат на 30 мин при температуре 38 °С Через 30 минут пробирки вынимают, охлаждают, добавляют по 1-2 капле 1 % раствора йода и перемешивают. Жидкость в пробирках в зависимости от степени расщепления крахмала может окрашиваться в желтый, розовый, красный и фиолетовый цвет. Раствор желтого цвета свидетельствует о полном расщеплении крахмала, фиолетовый – о том, что крахмал в растворе еще сохранился. Работу необходимо оформить в виде таблицы.
Расчет: Берется количество слюны в последней пробирке с желтой окраской. Если это четвертая пробирка, то разведение слюны в ней – 160 раз. Составляется пропорция: 1). 160 мл слюны расщепляет 2 мл 0,1 % р-ра крахмала; 2) 1 мл слюны расщепляет Х мл 0,1 % р-ра крахмала, т.е. амилокластическая активность слюны составляет 320 ед. Опыт № 2 Специфичность действия амилазы слюны Приборы и материалы: раствор амилазы (слюна), раствор крахмала 1%, раствор йода (раствор Люголя), раствор хлорида натрия, раствор сульфата меди. Ход работы: В три пробирки отмеряют: в 1 – 2,0 мл дистиллированной воды; во 2 – 1,6 мл дистиллированной воды + 0,4 мл 1 % раствора хлорида натрия; в 3 – 1,6 мл дистиллированной воды + 0,4 мл 1 % раствора сульфата меди. В каждую пробирку добавляют по 0,5 мл разведенной слюны, содержимое пробирок перемешивают и добавляют по 1,0 мл 1 % раствора крахмала. Перемешивают и оставляют стоять при комнатной температуре. Через 5 мин в три пробирки с водой (по 1 мл в каждой), подкрашенной каплей раствора йода, отмеряют по 2-3 капли содержимого каждой опытной пробирки. Наблюдают появление окрашивания. Через 10-15 минут проводят цветную реакцию с йодом с содержимым каждой из опытных пробирок. Для этого из трех опытных пробирок отмеряют по 2-3 капли содержимого и переносят их в три пробирки с водой (по 1 мл в каждой), подкрашенной каплей раствора йода. Результаты заносят в таблицу.
жүктеу/скачать 177,5 Kb. Достарыңызбен бөлісу:
| |||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||