Лабораторная работа Определение активности α-амилазы слюны
жүктеу/скачать 15,96 Kb.
|
Определение амилазы (1)
- Бұл бет үшін навигация:
- Йодная проба
- Реакция Троммера
- Отчёт о работе для студентов, выполнявших работу ОЧНО должен содержать
- Отчёт о работе для студентов, выполнявших работу ДИСТАНЦИОННО должен содержать
|
Лабораторная работа Определение активности α-амилазы слюны Фермент α -амилаза (диастаза) содержится в слюне и ускоряет гидролитическое расщепление α -1,4-гликозидных связей в молекулах полисахаридов (крахмала, гликогена) до декстринов и мальтозы. Процесс распада полисахаридов в присутствии α -амилазы включает в себя ряд стадий: крахмал ,амилодекстрины, эритродекстрин, ахродекстрины, альтотетроза, мальтоза. При этом нерасщепленный крахмал при взаимодействии с раствором йода дает синее окрашивание, амилодекстрины – фиолетовое, эритродекстрины – красно-бурое, ахродекстрины, альтотетроза и мальтоза – желтое. Кроме того, конечный продукт гидролиза крахмала – мальтоза – имеет свободную альдегидную группу, которую можно обнаружить реакцией Троммера (Фелинга). В основе пробы Троммера лежит окислительно-восстановительная реакция восстановления гидрата окиси меди (синего цвета) в гидрат закиси меди (красного цвета) при нагревании. Таким образом, по окраске раствора, содержащего слюну и крахмал, с йодом или проведением реакции Троммера можно выявить степень активности α -амилазы. Одним из характерных свойств ферментов, является термолабильность, т.е. чувствительность к температуре, при которой протекает реакция. Для многих энзимов максимальная скорость реакции наблюдается при 38-40С. При нагревании выше 50С они утрачивают свойства биологических катализаторов вследствие денатурации, при этом степень инактивирования зависит от длительности теплового воздействия. При низких температурах ферменты хорошо сохраняются, но скорость ферментативного катализа мала. При повышении температуры от 0С до 40С скорость реакции увеличивается, а затем тепловая денатурация фермента снижает ее. Ход работы Слюну разводят в мерном цилиндре в 10 раз. В чистую пробирку отливают небольшое количество (2-3 мл) разведенной слюны и кипятят ее в течение 5-8 минут, а затем охлаждают. В 4 пробирки наливают по 10 капель 1% раствора крахмала. В первые две пробирки добавляют по 10 капель разведенной слюны. В третью – 10 капель прокипяченной слюны. В четвертую – 10 капель воды (в качестве контроля). Первую пробирку помещают в ледяную баню, а остальные – в термостат или водяную баню при температуре 38С на 10 минут. После этого содержимое пробирок делят на 2 части и проводят качественные реакции на крахмал и продукты его расщепления (йодную пробу и пробу Троммера). Йодная проба. К 2 каплям исследуемого раствора приливают 1 каплю раствора Люголя (раствора йода в KI). Первая проба приобретает фиолетовое окрашивание, третья и четвертая окрашиваются в синий цвет вследствие отсутствия или инактивации -амилазы, вторая проба приобретает буро-желтую окраску в связи с расщеплением крахмала активной -амилазой до декстринов. Реакция Троммера. К 5 каплям исследуемой жидкости добавляют 5 капель 10% раствора едкого натра и 5 капель 1% раствора сернокислой меди. Содержимое пробирки нагревают над пламенем горелки. Появление красного цвета указывает на присутствие в растворе мальтозы и глюкозы (положительная реакция Троммера). Результаты исследования записывают в таблицу 1: Таблица 1-Результаты опыта
Отчёт о работе для студентов, выполнявших работу ОЧНО должен содержать: Цель работы Ход работы Результаты работы, представленные в виде таблицы. Уравнения реакций Выводы Отчёт о работе для студентов, выполнявших работу ДИСТАНЦИОННО должен содержать: Цель работы Теоретическое введение (Общая характеристика амилазы. Источники амилазы. Температурный оптимум для амилазы. Способы определения амилазы) Ход работы. Результаты работы, представленные в виде таблицы. Уравнения реакций Выводы Ответы на контрольные вопросы: К какому классу ферментов относится амилаза? Каков механизм ее действия? Как определяют количество фермента в исследуемом образце? Как можно влиять на время гидролиза крахмала? Как изменяется окраска реакционной смеси при добавлении раствора йода в течение реакции гидролиза крахмала? жүктеу/скачать 15,96 Kb. Достарыңызбен бөлісу:
| |||||||||||||||||||