О книге Special for Dabl-v aka Эукариот Фрида Карловна Черкес, Лина Борисовна Богоявленская, Наталья Александровна Бельская – Микробиология
Окраска по Граму (универсальный метод)
жүктеу/скачать 14,39 Mb. Pdf көрінісі
|
- Бұл бет үшін навигация:
- Окраска по Цилю - Нильсену (для кислотоустойчивых бактерий)
| Окраска по Граму (универсальный метод). Наиболее распространенным
методом дифференциальной окраски является окраска по Граму. В зависимости от результатов окраски все микроорганизмы делят на две группы - грамположительные и грамотрицательные. Грамположительные бактерии содержат в клеточной стенке магниевую соль РНК, которая образует комплексное соединение с йодом и основным красителем (генциановым, метиловым или кристаллическим фиолетовым). Этот комплекс не разрушается при действии спирта, и бактерии сохраняют фиолетовый цвет. Грамотрицательные бактерии не способны удержать основной краситель, так как не содержат магниевой соли РНК. Под действием спирта краситель вымывается, клетки обесцвечиваются и окрашиваются дополнительным красителем (фуксином) в красный цвет. 1. На препарат накладывают бумажку по Синеву и наносят несколько капель воды или раствор генцианового фиолетового. Окрашивают 1-2 мин. Снимают бумагу или сливают краситель. 2. Не промывая водой, наносят раствор Люголя до почернения (1 мин), затем краситель сливают. 3. Не промывая водой, наносят 96% спирт до отхождения красителя (30-60 с). Можно опустить препарат в стаканчик со спиртом на 1-2 с. 4. Промывают препарат водой. 5. Докрашивают фуксином Пфейффера 3 мин, промывают водой и высушивают. Микроскопируют с помощью иммерсионной системы. Окраска по Цилю - Нильсену (для кислотоустойчивых бактерий). Этот метод применяют для выявления бактерий туберкулеза и проказы, имеющих в оболочке клеток большое количество липидов, воска и оксикислот. Бактерии кислото-, щелоче- и спиртоустойчивы. Для увеличения проницаемости клеточной стенки первый этап окрашивания проводят при подогревании. 1. Фиксированный препарат покрывают фильтровальной бумагой и наносят фуксин Циля. Удерживая стекло пинцетом, препарат подогревают над пламенем горелки до отхождения паров. Добавляют новую порцию красителя и подогревают еще 2 раза. После охлаждения снимают бумагу и промывают препарат водой. 2. Препарат обесцвечивают 5% раствором серной кислоты, погружая 2-3 раза в раствор или наливая кислоту на стекло, затем несколько раз промывают водой. 3. Окрашивают водно-спиртовым раствором метиленового синего в течение 3- 5 мин, промывают водой и высушивают. Микроскопируют с помощью иммерсионной системы. Кислотоустойчивые бактерии окрашиваются в красный цвет, остальные - в синий (см. рис. 4). жүктеу/скачать 14,39 Mb. Достарыңызбен бөлісу:
|