"фараби əлемі" атты халықаралық ғылыми конференция материалдары


КЛОНИРОВАНИЕ кДНК ГЕНА ПОЛИ(АДФ-РИБОЗА) ПОЛИМЕРАЗЫ 2



Pdf көрінісі
бет230/372
Дата02.03.2022
өлшемі2,79 Mb.
#26858
1   ...   226   227   228   229   230   231   232   233   ...   372
Байланысты:
thesis114326

КЛОНИРОВАНИЕ кДНК ГЕНА ПОЛИ(АДФ-РИБОЗА) ПОЛИМЕРАЗЫ 2  
ARABIDOPSIS THALIANA В E. CОLI И ХАРАКТЕРИСТИКА АВТО-ПОЛИ(АДФ-
РИБОЗИЛ)ИРУЮЩЕЙ АКТИВНОСТИ РЕКОМБИНАНТНОГО БЕЛКА 
 
Қуанбай Ə.Қ., Алияскарова У.С., Рахматуллаева Г.Т., Тайпақова С.М.  
НИИ проблем биологии и биотехнологии 
Казахский Национальный университет имени аль-Фараби 
kuanbai.aigerim93@gmail.com
 
 
Поли(АДФ-рибоза)  полимераза  (PARP)  катализирует  синтез  полимеров  АДФ-рибозы 
ковалентно-прикрепленные  к  акцепторным  белкам.  При  этом  донором  остатков  АДФ-рибозы 
выступает  НАД
+
.  PARP  белки  могут  оказывать  значительное  влияние  на  различные  клеточные 
процессы, такие как транскрипция, деление клеток, репарация ДНК и целостность теломеров.    
Геном  Arabidopsis  thaliana,  широко  используемого  модельного  растительного  организма, 
кодирует  по  меньшей  мере  три  предполагаемых  PARP  фермента:  АtPARP1,  AtPARP2  и  AtPARP3. 
Высокая  степень  консервативности  на  уровне  аминокислотной  последовательности  между 
ферментами  арабидопсиса  и  млекопитающих  позволяет  предположить,  что  в  растениях  PARP 
выполняет  аналогичные  функции  как  в  животных  системах.  В  отличие  от  млекопитающих, 
значительно  мало  известно  о  поли-АДФ-рибозилировании  в  растениях.  Практически  не  известно  о 
акцепторных белках поли-ADP-рибозы и белках, взаимодействующих с ADP-рибозой. В растениях не 
обнаружены  PARилированные  белки,  кроме  гистонов  и  PARP.  Идентификация  новых  акцепторных 
белков  поможет  понять регуляторную  функцию PARилирования  в  развитии  растений  и  стрессовых 
реакциях. 
Нами  был  выделен  кДНК  ген  atparp2  с  применением  реакции  обратной  транскрипции  и 
полимеразной  цепной  реакции.  Осуществлена  функциональная  экспрессия  atPARP2  гистидиновым 
концом в E. cоli и очищена никель аффинной хроматографией до гомогенного состояния.  
С  помощью  MALDI-TОF  масс-спектрометрии  установлено  принадлежность  рекомбинантного 
белка  к  семейству  поли(АДФ-рибоза)-полимераз. Выявлен,  что  продуктом  экспрессии  гена  является 
глобулярный  белок  массой  72,2  кДа,  состоящий  из  637  аминокислот  (pI5,92).    С  применением 
очищенных  рекомбинантных  белков  atPARP2  были  получены  поликлональные  антитела  анти-
atPARP2.  
Автомодифицирующию 
активность 
atPARP2 
определяли 
с 
использованием 
олигонуклеотидного  дуплекса,  содержащий  разрыв  цепи  для  активации  процесса  поли-АДФ-
рибозилирования  в  присутствии  НАД.    В  результате  анализа  продуктов  реакции  методом  Вестерн-
блоттинга  с  анти-PAR  антителами  мы  показали  что  аtPARP2  в  присутствии  активирующей  ДНК 
может  катализировать  реакцию  авто-поли-АДФ-рибозилирования  путем  многократного  переноса 
ADP-рибозных групп из NAD+ на себя.  
В  присутствие  ингибитора  PARP  3-AB  АДФ-рибозилирование  аtPARP2  значительно 
блокируется.  Необходимо  отметить,  хроматографически  очищенный  аtPARP2  частично  АДФ-
рибозилирован  как  в  присутствии,  так  и  в  отсутствии  активирующей  ДНК  и  3-AB,  так  как 
распознается анти-PAR антителами.  


158 
 
Можно 
предположить, 
что 
очищенные 
аtPARP2 
авто-АДФ-рибозилированы 
до 
хроматографической очистки, т.е. во время экспрессии в E. cоli.  
Научный руководитель: д.б.н., профессор, академик НАН РК Бисенбаев А.К.  
 


Достарыңызбен бөлісу:
1   ...   226   227   228   229   230   231   232   233   ...   372




©emirsaba.org 2024
әкімшілігінің қараңыз

    Басты бет