Гендік инженерия


Жасанды ашытқы хромосомалар



бет5/6
Дата15.11.2023
өлшемі4,6 Mb.
#123125
1   2   3   4   5   6

6. Жасанды ашытқы хромосомалар

  • S. Cerevisiae үшін экспресияланатын 3 вектор түрі бар:
  • 1. Эписомалық, немесе плазмидалық векторлар (YEps)
  • 2. Интеграциялық векторлар (Yips)
  • 3. Жасанды ашытқы хромосмалары (YAC)

6. Жасанды ашытқы хромосомалар

  • 1. Плазмидалық векторлар секреттелетін және секреттелмейтін гетерологиялық ақуыздарды алу үшін кен қолданылады. Бірақ плазмида негізіндегі экспрессия системалары жасушаны үлкен көлемде (>10 л) өсірген кезде тұрақты болмайды.
  • 2. Экспрессиялаушы вектордын хромосомалық ДНҚ-ға интеграциясы кезінде стабилді рекомбинатты ағза пайда болатына қарамастан екінші типті вектор кен қолданыс таппады, себебі клондалған геннің көшірмелер саны хромосомаға бір генмен шектеледі, басқа сөзбен айтқанда ақуыздың шығымы төмен болады.
  • 3. E. coli жасушаларында өсірілген және ашытқы (S. Cerevisiae) жасушаларына енгізілген кіші плазмидалар. YAC экариотты хромосоманың кішкентай моделі. YAC-тар құрамына репликация ориджині, селективті маркерлер мен клетка бөліну процесінде YAC-тың жаңадан пайда болған клеткаларына сегрегациясын қамтамасыз ететін 2 теломера мен 1 центромера кіреді. Бөтен ДНҚ фрагменттері YAC-тың ортасында орналасқан рестрикция сайттарына енгізіледі. YAC-тар ұзындығы 200 кб-дан (1 кб = 1000 н.ж) 2 мегабазға (1 мб = 1 миллион н.ж) дейін үлкен ДНҚ фрагменттерін енгізуге мүмкіншілік береді. YAC-тар ВАС-тар секілді адм геномы жобасында маңызды рөл атқарды.

2. Вектор.

  • 80-ніңші жылдары pBR322 плазмидалық векторры ең әйгілі және уневирсалды веторлардың бірі болған. Плазмида ұзындығы 4361 н. ж. Ампицилин және тетрациклин антибиотиктеріне тұрақты екі гені бар. Tet генінде уникалді сайтар BaмHI, HindII, SalI үшін, және PstI сайты Amp генінде орналасқан (негізі осындай сайттар саны 40-қа жуық), ал EcoRI кодталмайтын тізбектере орналасқан, және E. coli жасушасында репликацияланатын басталу сайты бар. Бөгде ДНҚ BaмHI сайтына орнығады.


Достарыңызбен бөлісу:
1   2   3   4   5   6




©emirsaba.org 2024
әкімшілігінің қараңыз

    Басты бет