Кенжебаева Сəуле Сағындыққызы биотехнологиядағЫ Қазіргі əдістер
Мембранды көпіршіктерде (везикулалардағы) Н
жүктеу/скачать 5,04 Mb. Pdf көрінісі
|
| 1.13. Мембранды көпіршіктерде (везикулалардағы) Н
+ жəне Сa 2+ иондарының активті тасымалдаунын зерттеу Өсімдік клеткаларынан алынған мембранды фракциялардың көпіршіктерінде флуоресцентті зондтардың көмегімен, сонымен қатар Н + жəне Сa 2+ иондарының белсенді тасымалдануы зерттеледі. Ол үшін АТФ-пен толтырылған мембранды көпіршіктер ортаға орналастырыла- ды. Оның құрамында 3 ммоль/л Mg 2+ ионы бар, мысалы, флуоресцентті рН-сезгіш зондтарда 3-амино-6-хлоро-2-метоксиакридин болады. Флуоресценцияның қарқындылығы мұнымен өзгермейді, себебі көпіршіктердің мембраналары жəне Mg 2+ иондары өткізгіш емес. Дұрыс бағыт көрсетілген көпіршіктердің ішінде жүретін АТФ-азалық реакцияны қосуда Mg 2+ иондары енгізіледі жəне А23187 ионофордың қолданылуымен жетістікке жетеді. Ортада Сa 2+ иондарының бол- мауы кезінде басқа да қосвалентті катиондарды, соның ішінде Mg 2+ иондарын да тасымалдауға қабілетті. рН-сезгіш зондтарының флуоресценциясының АТФ-азалық реакциясының қарқындылығы өзгереді жəне сутегі иондарының сыртқы ортаға трансмембраналы та- сымалдануын дəлелдейді. Протонофор карбонилцианидхлорфенилги- дрозбен (КЦФХГ) өңдеу сутегі иондарының АТФ-тəуелді тасымалдау- ын тоқтатады. Бұл протондық АТФ-аза плазмалемма көпіршіктерінде 57 табылғандықтан, ванадатпен ингибирленді жəне нитратқа сезімтал емес, оны Н + -АТФ-азалардың Р-типіне жатқызуға болады. Сa 2+ -иондарының АТФ-тəуелді тасымалдануын ингибиторлы талда- уы диэтилстильбестролдың (ДЭС) жүгері колиоптилер көпіршіктерінің плазмалеммаларына Сa + иондарының белсенді өту үдерісін бəсеңдетіні (80%) көрсетілген, ал натрий ортованадаты 90%, бұл сорғының АТФ- азаның Р-типіне жататынын көрсетеді. Сол себепті берілген жүйеде Сa 2+ белсенді тасымалдануы плазмалемманың Сa 2+ -АТФ-азасының жұмысымен анықталатыны көрсетіледі. жүктеу/скачать 5,04 Mb. Достарыңызбен бөлісу:
|